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1.山东省淄博市淄川区医院，山东 淄博 255100；2.山东阿如拉药物研究开发有限公司，山东 济南 250101

藏药仁青常觉联合环磷酰胺治疗白血病的实验研究

吴洪革1邵成雷2付素心2*

1.山东省淄博市淄川区医院，山东 淄博 255100；2.山东阿如拉药物研究开发有限公司，山东 济南 250101

目的观察藏药仁青常觉对抗肿瘤化疗所致的免疫抑制。方法通过仁青常觉联合环磷酰胺治疗L615白血病小鼠、P388白血病小鼠的药效学实验研究，比较各实验组IL-2、IL-6、IFN-γ、NKC等细胞因子的变化。结果仁青常觉可以调节T细胞亚群比例及促进IL-2、IL-6、IFN-γ、NKC等细胞因子的分泌，且呈浓度依赖性。结论仁青常觉与化疗药物同用，能提高机体免疫，有助于化疗的完成。

仁青常觉；环磷酰胺；白血病；实验研究

仁青常觉系藏族验方，成方于公元八世纪，具有一千多年的应用历史，现收载于《中国药典》(2010版)一部。仁青常觉依据藏医药学原理，由珍珠、朱砂、檀香、降香、沉香、诃子、牛黄、人工麝香、西红花等精选的160余味纯天然、珍贵、稀有藏药材组成，有“百病一药”、“药之珍宝”等美称。临床上广泛用于肿瘤、胃肠溃疡、各种中毒症、缺铁性贫血等，特别对萎缩性胃炎、久治不愈的顽固性疾病等有特殊疗效。能提高机体免疫力和抗应激能力，减轻放化疗的毒副反应[1]。本文通过环磷酰胺联用仁青常觉治疗L615白血病小鼠、P388白血病小鼠的药效学实验，观察仁青常觉对抗肿瘤化疗所致的免疫抑制，对有效保证化疗的完成，具有积极的意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 昆明种一级小鼠，由山东鲁抗医药股份有限公司提供，雌雄各半，体重18～22g，合格证号：SCXK(鲁)20080002。

1.1.2 主要试剂和药品 环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司生产；标准重组人白介素-2(北京双鹭药业股份有限公司生产)；Yackl及IL-2依赖细胞株CTLL(中国科学院上海生命科学院细胞资源中心提供)；RPMII640细胞培养液及胎牛血清(华美生物工程公司生产)；四甲基偶氮唑盐(MTT)、十二烷基磺酸钠及刀豆球蛋白、二甲基甲酰胺均为Sigma公司生产；仁青常觉(金诃藏药股份有限公司生产)。

1.1.3 仪器 加样器、CO2培养箱、ELX-800酶标仪，均由美国Bio-Tek公司生产；96孔平底细胞培养板、Epics流式细胞仪，由美国Beckman公司生产。

1.2 实验方法

1.2.1 仁青常觉联合环磷酰胺对L615白血病小鼠的影响 取健康昆明种小鼠120只，雌雄各半，按体重随机分为6组，每组20只，即正常对照组、模型对照组、化疗组、化疗加仁青常觉低剂量组、化疗加仁青常觉中剂量组、化疗加仁青常觉高剂量组。除正常对照组外，各组小鼠接种L615白血病细胞0.2ml(在无菌条件下取L615白血病小鼠脾制成25%生理盐水细胞悬液，小鼠皮下接种)，于接种后第3d给药，化疗组腹腔注射环磷酰胺200mg/(kg·d)；化疗加仁青常觉低剂量组、化疗加仁青常觉中剂量组和化疗加仁青常觉高剂量组除注射环磷酰胺外，分别灌胃给予仁青常觉75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg，上、下午各1次；正常对照组和模型对照组腹腔注射生理盐水0.2ml/(只·d)，同时上、下午各灌胃相同体积的生理盐水。于第5天每组取10只动物处死，取脾脏匀浆，流式细胞仪测定T细胞亚群，酶联免疫法测定IL-2，IL-6，IFN-γ活性，余下各动物进行生存期观察。

1.2.2 仁青常觉联合环磷酰胺对P388白血病小鼠的影响 取健康昆明种小鼠48只，接体重随机分为6组，每组8只，即正常对照组、模型对照组、化疗组、化疗加仁青常觉低剂量组、化疗加仁青常觉中剂量组、化疗加仁青常觉高剂量组。除正常对照组外，各组小鼠接种P388淋巴细胞白血病瘤株(接种方法[2]：取腹水型P388白血病小鼠，脱颈椎处死，腹部消毒，抽吸腹水，加入生理盐水混匀，显微镜下调整细胞浓度为1.5×107个/ml，每只小鼠右腋下注射0.2ml)。化疗组腹腔注射环磷酰胺35mg/(kg·d)，连续6d；化疗加仁青常觉低剂量组、化疗加仁青常觉中剂量组、化疗加仁青常觉高剂量组除注射环磷酰胺外，分别灌胃给予仁青常觉150mg/kg、300mg/kg、600mg/kg，连续灌胃给药14d;正常对照组和模型对照组给予相同体积的生理盐水。于第15天脱颈椎处死，在无菌条件下取脾脏，匀浆，测定NKC、IL-2活性。

2 结果

2.1 仁青常觉联合环磷酰胺对L615白血病小鼠的影响

2.1.1 对生存期的影响 实验结果表明，与模型对照组比较，化疗加仁青常觉低、中、高剂量组生存期明显延长，差异具统计学意义(P<0.05)；与化疗组比较，化疗加仁青常觉低、中、高剂量组生存期亦明显延长，差异具统计学意义(P<0.05)。结果见表1。

表1 各实验组生存期比较

注：与模型对照组比较，*P<0.05；与化疗组比较，△P<0.05。

2.1.2 对T细胞亚群的影响 实验结果表明，与模型对照组比较，化疗加仁青常觉低、中、高剂量组CD3+、CD4+明显增加，CD8+明显减少，CD4/CD8比值明显增加，差异具有统计学意义(P<0.05)；与化疗组比较，化疗加仁青常觉低、中、高剂量组亦表现出CD3+、CD4+明显增加，CD8+明显减少，CD4/CD8比值明显增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。结果见表2。

表2 对T细胞亚群的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，△P<0.05；与化疗组比较，▲P<0.05。

2.1.3 对IL-2，IL-6，IFN-γ活性的影响 与模型组比较，化疗加仁青常觉低、中、高剂量组IL-6、IFN-γ明显增加，差异具有统计学意义(P<0.05)；与化疗组比较，化疗加仁青常觉低、中、高剂量组IL-2、IL-6、IFN-γ明显增加，差异具有统计学意义(P<0.05)，结果见表3。

表3 对IL-2，IL-6，IFN-γ活性的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，△P<0.05；与化疗组比较，▲P<0.05。

2.2 仁青常觉联合环磷酰胺对P388白血病小鼠的影响 实验结果表明，与模型组比较，化疗组NKC及IL-2活性明显降低，差异具有统计学意义(P<0.01)；与化疗组比较，化疗加仁青常觉中、高剂量组IL-2活性明显增加，差异具有统计学意义(P<0.01)。结果见表4

表4 对NKC及IL-2活性的影响

注：与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与化疗组比较，#P<0.05，##P<0.01。

9 心叶琉璃草 C. triste Diels.资源分布

中国特有植物。分布于云南、四川。生于海拔2500～3100米的阴湿山坡及松林下。

10 绿花琉璃草 C. viridiflorum Pall.资源分布

国内：分布于新疆；国外：分布于苏联及西伯利亚。生于海拔700～1700米的灌木林缘。别名：绿花倒提壶。

11 西南琉璃草 C. wallichii G. Don.资源分布

国内：分布于云南、四川、西藏及甘肃；国外：分布于阿富汗、巴基斯坦、克什米尔地区及印度；生于海拔1300～3600米的山坡草地、荒野路边及密林阴湿处。

12 倒钩琉璃草(为西南琉璃草的变种)C. wallichii G. Don var. Glochidiatum.资源分布

国内：分布于西藏、云南、四川、甘肃及青海；国外：分布于阿富汗、巴基斯坦、印度、缅甸。 生于海拔1800～4000米的林缘草坡。别名：倒钩西南琉璃草、稀刺琉璃草、粘粘草。

13 琉璃草/锡兰琉璃草 C. zeylanicum (Vahl) Thunb.资源分布

国内：分布于陕西、河南、甘肃、安徽、湖北、广东、广西、贵州、云南、四川、西藏及台湾等地[5]。国外：分布于阿富汗、巴基斯坦、印度、菲律宾、马来西亚、新几内亚及日本。生于海拔300～3040米林间草地、向阳山坡及路边。别名狗屎花、蓝布裙、拦路虎、铁链子、贴骨散、牛舌头草、绿花菜。以根和叶入药，有清热利湿、活调经之功效，主治肝炎、月经不调、水肿，外用治疮瘕痈肿、毒蛇咬伤、跌打损伤、骨折。叶可止血。

14 云南倒提壶两新变型

红花倒提壶C.amabileStapfetDrummf．Ruberum，分布于云南大理下关、洱源、上关、漾濞等地。生于海拔2100米以上的山坡草地。白花倒提壶C.amabileStapfetDrummf．1eucanthum，分布于云南大理苍山、永平、弥渡、巍山、洱源、鹤庆等地。生于海拔2200米以上的阴湿地带。全草入药，治疗白带和淋证。

综上所述，云南、贵州、四川为该植物的主要分布地区，分布着倒提壶的不同品种，为倒提壶的进一步开发研究提供了丰富的资源。

[1]刘玉兰.中国琉璃草属植物[J].甘肃师大学报(自然科学版)，1979，(2)：64-72.

[2]中国科学院中国植物志编委会.中国植物志[M].北京：科学出版社，1989.

[3]刘玉兰.琉璃草属植物之新种[J].植物分类学报，1981，19(4):519-520.

[4]董晓东,赵宏.云南倒提壶两新变型[J].植物研究，1997，17(2)：141-142.

[5]常章富．野菜疗法[M]．长沙：湖南科学技术出版社，2001:36-37.

ExperimentalstudyofRenqingchangjuecombinedwithcyclophosphamideontreatmentforleukemia

WU Hong-ge1SHAO Cheng-lei2FU Su-xin2

(1.The hospital of Zichuan District in zibo,ShanDong Province ,zibo 255100, china;2.Shandong Arura Medicine Research And Develop Corportion, ShanDong Province , Jinan 250101, china)

Objectiveto observe Renqingchangjue against chemotherapy-induced immune suppression.MethodsThrough experimental studies of Renqingchangjue in combination with cyclophosphamide on L615leukemia mice and P388leukemia mice ,comparing cytokines changes of IL-2、IL-6、IFN-γ、NKC.ResultsRenqingchangjue can regulate the percentage of T cell subgroup and promote the secretion of cytokines such as IL - 2, IL - 6, IFN - gamma, NKC, etc.ConclusionRenqingchangjue combined with chemotherapy drugs,can improve the body immunity,helps chemotherapy completed.

Renqingchangjue; cyclophosphamide; leukemia; Experimental study

吴洪革，淄博市淄川区医院，主管药师，研究方向：药学。

付素心，E-mail：FSX351@163.com

R285.5

A

1007-8517(2014)15-0021-03

2014.05.27)