袁 杰 石 天 罗 艳 周发为

(湖北民族学院附属民大医院输血科，恩施445000)

造血干细胞移植(Hematopoietic stem cell trans- plantation，HSCT)是血液系统恶性疾病唯一根治的手段。HSCT可使患者的造血功能得以恢复和重建，但是由于这种治疗方法在配型上常常是基于异种血型抗原的移植方式，也伴随着一些输注性并发症，这些并发症与血液细胞的抗原系统和体液免疫系统的差异密切相关。HSCT中的异基因细胞的植入、植入后移植物抗宿主病(Graft-versus-host disease，GVHD)、感染的发生与转归以及原发恶性疾病如白血病的复发，均有其免疫基础［1］。研究显示，ABO血型不合会增加移植后纯红细胞再生障碍(Pure red cell aplasia，PRCA)的发生风险，从而导致红系造血恢复迟缓及红细胞输注量增加［2］。还有报道称A供O是ABO血型不合的HSCT后PRCA发病的危险因素［3］。发生PRCA的受者需要为期几个月的红细胞输注，这样容易导致铁超负荷，从而引发其它并发症［4］。因此，对异基因HSCT移植后受者的血细胞及其抗原、血清抗体等情况进行跟踪检测研究，对于移植后的输血治疗十分必要，本研究选取30例人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen，HLA)配型相合、ABO血型抗原不合的HSCT受者，对其移植前后的ABO血型抗原强度和抗体效价进行了对比分析。

1 材料与方法

1.1 研究对象 本研究选取30名湖北民族学院附属民大医院住院患者作为临床研究样本，其中男性19例，女性11例;18～28岁8例，29～38岁15例，39～48岁7例;急性白血病15例，慢性粒细胞白血病9例，急性单核细胞白血病3例，重症再生障碍性贫血3例;其供体均为与患者有血缘关系的兄弟姐妹或配型相合者。

1.2 检测试剂 抗A、抗B血型定型试剂:10毫升规格，上海血液生物医药有限责任公司提供。单克隆抗D血型定型试剂:10毫升规格，Millipore Limited生产。抗人球蛋白试剂血清:3毫升规格，长春博德生物技术有限责任公司提供。凝聚胺配血试剂:150人次/盒，上海博普生物技术有限公司提供。微柱凝胶卡:江阴力博医药生物技术有限公司提供。ABO定型试剂红细胞悬液:自配。

1.3 检测方法 血型鉴定方法:用生理盐水试管法和微柱凝胶法，对HSCT供者和受者进行ABO及RhD血型鉴定。ABO血型抗原强度和抗体效价检测方法:将血型定型试剂血清用生理盐水稀释，加受试者5%红细胞悬液，测定ABH抗原。抗原强度以效价和积分采用Warsh法判定，应用抗人球蛋白法、凝聚胺法和微柱凝胶法进行交叉配血试验。HSCT移植后跟踪检测方法:在研究对象中选取2名受者，在移植后第1、2、4、5、7、8、10 周定期检测其ABO血型抗原强度和抗体效价的变化。

1.4 临床处理 HSCT移植前预处理:使用全身照射加化疗，化疗药物主要有环磷酰胺、阿糖胞苷、马利兰等，受者在移植前进入层流病房，进行全环境保护。

HSCT移植后预防GVHD处理:采用环胞菌素A加短疗程甲氨喋呤方案。用CS 3000 Plus血细胞分离机采集干细胞，分离异基因供者外周血造血干细胞，尽量减少红细胞和/或血浆的混入。

2 结果

2.1 移植前血型配合情况 在研究对象中，30例HSCT受者与供者的ABO血型均不相合，在仅主侧不合配对中，O-A配对有3对，O-B配对有4对;在仅次侧不合配对中，A-O配对有9对，B-O配对有8对;在主次侧均不合配对中，A-B配对有3对，B-A配对有3对。受者与供者的RhD血型抗原均为阳性，红细胞血型系统不规则抗体筛选均为阴性，HLA-A-B位点配型完全相合，HLA-A-B-DR位点配型部分相合。

2.2 移植前后ABO血型的转变 检测结果显示，在ABO血型仅主侧不合的受者，移植后检测发现在其血型抗原转变后，血清中可检出相应的凝集素，正反定型结果相符;在ABO血型仅次侧不合的受者，血型抗原转变后，A型受者血清中只检出抗B凝集素，B型患者血清中只检出抗A凝集素;在ABO血型主次侧均不合的受者，血型抗原转变后，血清中未检出相应的凝集素，出现了ABO血型正反定型结果不相符的反应格局(见表1)。

2.3 HSCT受者移植前后ABO血型抗原和抗体效价的变化 从研究对象中选取2例HSCT受者，其中一个为ABO血型主次侧均不合(A-B)，一个为ABO 血型仅次侧不合(B-O)，在移植后 1、2、4、5、7、8、10周定期检测其ABO血型抗原强度和抗体效价的变化。检测结果显示，在ABO血型主次侧均不合的受者，到移植后第4周，血型抗原发生转变，变为供者血型，此时血型抗原凝集强度为1+(效价评分5)，到移植后第7周，凝集强度增加为3+(效价评分10)，到移植后第10周，凝集强度增加为4+(效价评分12)。血清中未能检出抗A凝集素;ABO血型仅次侧不合的受者，到移植后第7周，血型抗原发生转变，变为供者血型，到移植后第8周，血清中只能检出抗A凝集素，抗体效价为1∶4(见表2)。

表1 研究对象HSCT移植前后ABO血型鉴定结果Tab.1 Identification of the ABO blood types of the research objects before and after HSCT

表2 HSCT对2名受者ABO血型的抗体效价的影响Tab.2 Influence on the ABO blood antibodies titers by HSCT

3 讨论

异基因HSCT的实施是先对供者造血干细胞采集和处理，并对受体采取必要的移植前预处理和防范GVHD措施，而后将造血干细胞植入受体以达到重建造血系统目的方法。本研究的检测结果显示，所有30例ABO血型抗原不合的配对，移植后受者的血型抗原转变为供者的血型抗原，其中，主次侧均不合的配对在移植后第4周血型抗原发生转变，仅次侧不合的配对在移植后第7周血型抗原发生转变;仅主侧不合的配对，移植后的正反定型结果相符;仅次侧不合的配对，第8周血清中可检出凝集素(抗B或抗A)、抗体效价为1∶4;主次侧均不合的配对，移植后血清中未检出凝集素，且出现了正反定型结果不相符的结果。研究结果显示有一部分受者血型正反定型不相符。在一些针对ABO血型正反定型不相符原因的研究中，血液系统疾病及HSCT所致的血型抗体减弱这一原因占比例较大［5-7］。所以，本研究结果中的正反定型不相符，可能是由于受者本身血型抗体减弱，也可能与HSCT移植前对受者使用的预处理措施导致免疫耐受和免疫系统抑制有关。

移植后免疫恢复阶段发生的潜在并发症强烈地影响着 HSCT的临床转归［8］。有研究结果显示，HSCT与其联合骨髓移植比较，造血重建时间及2年生存率无明显差异，但前者急、慢性GVHD发生率较高［9］。另外，有单因素相关研究结果显示，疾病状态、受者年龄、供者年龄、回输CD34+细胞与GVHD的发生无显著相关性，而HLA配型、供者性别、早期感染与与 GVHD的发生有相关性［10］。因此，临床上在进行HSCT供者-受者配对时，一定要选择HLA相合的配对，由于在造血干细胞中有功能的ABO血型抗原缺乏，因此，即使供者与受者的ABO血型相合程度不高，抗A和抗B凝集素对造血干细胞也不会产生损害作用。在HSCT移植后，必须进行输血支持治疗，且要对受者的血型抗原和抗体效价的变化进行随时监测，选择适当的血液成分进行输注。在受者血型抗原转变之前，应注输O型洗涤红细胞以防止凝集素破坏植活的红细胞，引起输血反应。ABO血型仅主侧不合，红细胞应输注O型，血小板和血浆应输注供者型或AB型;ABO血型仅次侧不合，红细胞应输注供者型，血小板和血浆应输注受者型或AB型;ABO血型主次侧均不合，红细胞应输注O型，血小板和血浆应输注AB型。有研究显示对输血成分滤除白细胞后输注，可以降低患者血小板HLA抗体同种免疫的发生率，显著提高临床输注治疗效果［11］。因此，输注的血液成分要尽量滤除白细胞并进行辐照，预防发热性输血反应和GVHD的发生。

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