陈思思，王 彦，杨 静，陈显久

胰岛素抵抗（IR）是胰岛素作用的靶器官对胰岛素作用的敏感性下降，即正常剂量的胰岛素产生低于正常生物学效应的一种代谢状态。胰岛素与细胞表面受体的结合或胰岛素信号在胞内的传递过程中，任何一个信号转导环节受到抑制均有可能引起IR［1］。研究表明在肥胖者体内血浆游离脂肪酸（FFA）的水平是增高的［2］，血浆高水平的FFA显著影响外周组织细胞，特别是脂肪细胞对胰岛素的敏感性，使脂肪细胞糖代谢功能障碍，导致IR［3］。因此，FFA在IR发病过程中的作用已成为近年来研究的热点，但用FFA制备体外细胞IR模型无论方法还是剂量目前还未达成共识。软脂酸（PA）是FFA的一种，本实验旨在探讨用PA制备3T3－L1脂肪细胞胰岛素抵抗（IR）模型的方法。

1 材料与方法

1.1 实验试剂 3T3－L1前脂肪细胞株由山西医科大学第一医院内分泌实验室冻存。高糖DMEM培养基购自Gibco－BRL（公司；胎牛血清（FCS）购自杭州四季青生物有限公司；3－异丁基－1－甲级黄嘌呤（IBMX）、甲状腺素（T4）、不含游离脂肪酸的BSA（FAF BSA）、牛血清白蛋白（BSA）、二甲基亚砜（DMSO）、PA均购自Sigma公司；葡萄糖测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及诱导分化 参考文献［4］的方法进行3T3－L1前脂肪细胞的培养及诱导分化操作：在37℃、5%CO2的条件下，3T3－L1前脂肪细胞在含有10%FCS的高糖DMEM中培养，待细胞融合2d后，加入含有0.5mmol／L IBMX、0.25 μmol／L地塞米松、0.2nmol／L甲状腺素、250nmol／L胰岛素和10%FCS的高糖DMEM培养4d，期间换液1次，然后换上含有0.25μmol／L地塞米松、0.2nmol／L甲状腺素、250nmol／L胰岛素和10%FCS的高糖DMEM培养，2d换液1次，诱导分化8 d～12d的3T3－L1前脂肪细胞90%～95%呈脂肪细胞表型。……