暴立娟，宋庆凤，李 杰

（东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150030）

重组木聚糖酶的安全高效表达与应用研究

暴立娟，宋庆凤，李 杰*

（东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150030）

以pPIC9为载体能够实现里氏木霉木聚糖酶基因（xyn2）在巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）中的高效表达，但是却需要甲醇诱导，从而限制其在食品加工等领域的应用。本研究以毕赤酵母组成型启动子——GAP启动子替换pPIC9上的甲醇诱导型启动子AOX，成功地表达了木聚糖酶。在此基础上以经密码子优化后的INU信号肽替换载体上原有的α-Factor信号肽，同时根据已发表的基因序列和AOX1基因的氨基酸序列，按照毕赤酵母的酵母偏爱密码子，对毕赤酵母表达载体pPIC9上的α信号肽序列进行改造，结果表明，两种信号肽均能够引导木聚糖酶的分泌。通过添加0.01%的Triton，可以有效增强细胞膜的通透性，提高外源蛋白的分泌能力。薄层层析结果表明，木聚糖酶的酶解产物为木二糖和木三糖为主的低聚木糖及少量的木糖。

木聚糖酶，GAP启动子，INU信号肽，α信号肽，低聚木糖

木聚糖是主要由吡喃木糖通过β-1，4-糖苷键连接而成的多聚糖，是半纤维素的主要成分，广泛存在于植物细胞壁中，是自然界中含量仅次于纤维素的可再生资源［1］。木聚糖酶（1，4-β-D-xylan xylanohydrlase，EC 3.2.1.8）通过内切方式水解木聚糖分子中的β-1，4-木糖苷键，水解产物以木二糖和木三糖为主，以及少量的木糖和阿拉伯糖［2］。木聚糖酶在食品、造纸、饲料等领域都有广泛的应用。目前，低聚木糖主要通过酶法降解木聚糖制备。……