郑 丽，王 昕，王景会，杨贞耐，，*

(1.吉林大学生物与农业工程学院，吉林长春130024; 2.吉林省农业科学院农产品加工研究中心，吉林长春130033)

微小毛霉凝乳酶基因在毕赤酵母中的诱导表达研究

郑 丽1，王 昕1，王景会2，杨贞耐1，2，*

(1.吉林大学生物与农业工程学院，吉林长春130024; 2.吉林省农业科学院农产品加工研究中心，吉林长春130033)

目的:研究重组毕赤酵母GS115PJ5诱导表达微小毛霉凝乳酶过程中酵母生长、产酶及培养液总蛋白变化情况。方法:测定毕赤酵母生长曲线、凝乳酶凝乳活性、蛋白水解活性、培养基上清液总蛋白含量。结果:毕赤酵母在开始诱导24h后即进入稳定生长期，并保持到240h，然后进入衰亡期。SDS-PAGE显示在分子量约为47000处有目的凝乳酶条带，凝乳酶在培养144h后开始大量积累，酶活性迅速提高，192h时凝乳活性达到最大值300SU/mL，蛋白水解活性为10.75U/mL，凝乳活性与蛋白水解活性的比值(C/P)达到最大值27.9，上清液总蛋白含量为0.189mg/mL。结论:微小毛霉凝乳酶基因在毕赤酵母中得到了有效的表达。

微小毛霉凝乳酶，巴斯德毕赤酵母，表达

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

重组巴斯德毕赤酵母菌株GS115PJ5(基因组中整合有微小毛霉凝乳酶基因) 由本实验室构建获得;YPD BMGY BMMY培养基组成和配制 见Invitrogen公司毕赤酵母培养手册。

全自动凝胶成像系统 AlphaImager HP;蛋白电泳设备 Bio-rad Mini-Protean;台式离心机Eppendorf 5415D;紫外可见分光光度计 Varian Cary 300;高速冷冻离心机 Thermo Sorvall Evolution RC; -80℃超低温冰箱 Thermo Electron 705;显微镜图像处理系统 BX51+DP71;全温振荡培养箱 HZQ -X100;高压蒸汽灭菌器 MLS-3780。

1.2 实验方法

1.2.1 重组毕赤酵母诱导表达 将重组毕赤酵母GS115PJ5接种于 YPD固体培养基中，划线分离，30℃培养2d，挑取单菌落接种于装有50mLBMGY培养基并经过灭菌的500mL三角瓶中，30℃、260r/min培养24～32h，至OD600达到2.0～6.0。……