王敏

血管性痴呆是脑血管疾病导致的认知功能障碍的临床综合征，是神经系统常见病、多发病。银丹心脑通软胶囊中的银杏叶、丹参、大蒜等有效成份结合能扩张血管，促进血液循环，预防和消除动脉粥样硬化。本研究采用血管夹闭法(4-VO法)复制VD大鼠血管性痴呆模型，初步探讨血管性痴呆影响学习记忆可能机制以及YDXNT对AD的防治作用及机制。

1 资料与方法

1.1 试剂和仪器 YDXNT(本室自制，HPLC测定纯度为90%);丙二醛(MDA)测定试剂盒、免疫组化试剂盒(北京中杉生物工程有限公司)，羊多克隆NPY抗体(南京建成生物公司)。

1.2 方法

1.2.1 实验动物分组 健康SD大鼠30只，3～4月龄，雄性，体质量200～250g，由烟台绿叶制造集团提供。实验分为假手术组(Sham组)、VD模型组(VD组)、YDXNT处理组(YDXNT+VD组)。动物模型制备采用4-VO法建立VD大鼠模型。模型成功后YDXNT组灌胃:YDXNT软胶囊每粒中1/3量，溶于生理盐水15 ml，使之均匀，取1 ml灌胃，3次/d，连续4周，Sham组与VD组均灌胃等量生理盐水;6周后，开始测定。

1.2.2 模型的建立 采用大鼠4-VO法制成VD大鼠模型:将大鼠用10%的水合氯醛(35 mg/kg)腹腔注射麻醉后，分离双侧颈总动脉。用4号丝线结扎。在距尾尖1cm处剪断放血约0.3 ml热凝止血。阻断血流20 min，松开丝扣再灌注10 min后，再次阻断血流20 min，切口局部注射庆大霉素0.2万U。对照组只分离颈总动脉，穿线但不结扎，尾部不放血。

1.2.3 学习记忆能力行为学测定 定位航行实验历时4 d，每天上、下午定时各训练1次，检测大鼠找到平台的时间及游泳路径长度，第5天撤除平台作空间搜索实验，将大鼠从同一入水点放入水中，记录120 s内大鼠在原平台所在象限的搜索时间及原平台所在象限游泳距离占总距离的百分比。

1.2.4 海马组织NPY检测方法 取血后，结扎胸主动脉，经左心室-升主动脉插管，快速灌注300～400 ml磷酸盐缓冲液冲洗脑组织至流出液体澄清，继之灌注4℃的4%多聚甲醛溶液灌注过程中动物四肢抽动，全身发白，逐渐变硬，持续灌注30～60 min，然后剥离脑，置于同浓度多聚甲醛溶液中后固定12 h以上。修块，取海马脑片，梯度乙醇脱水二甲苯透明，石蜡包埋后，行冠状切片，片厚约4μm。每只大鼠选取含室旁核海马切片3～5张，用涂有多聚赖氨酸载玻片捞片。以下Fos蛋白检测按试剂盒要求进行。采用LeicaQWin细胞图像分析系统(德国Leica公司)在PAG随机取5个高倍视野(×400)计算NPY免疫反应阳性产物的平均光密度(MOD)。

1.3 统计学方法 采用SPSS 11.0 for Windows软件对实验结果进行分析。实验所得数据用平均数±标准差(±s)表示，组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。

表1 寻找平台所需潜伏期组间比较( ± s，n=10)

表1 寻找平台所需潜伏期组间比较( ± s，n=10)

注:与sham组比较*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与VD组比较△P＜0.05，△△P＜0.01

组别潜伏期(s)第1天 第2天 第3天 第4天6.0 VD组 114.30±18.71＊＊ 98.43±20.53＊＊ 91.34±19.80＊＊ 85.80±20.32＊＊YDXNT+VD组 91.22±20.51＊△ 71.00±16.80＊△△ 55.12±12.66＊＊△△ 30.23±13.35 sham组 67.25±22.42 53.16±15.23 29.20±11.23 10.41±＊＊△△

2 结果

2.1 空间学习记忆行为学测试结果 (1)大鼠寻找平台所需潜伏期及搜索距离均有随训练进程缩短的趋势。(见表1、表2)。(2)VD组和YDXNT+VD组与假手术组比较，在定位航行实验中大鼠的逃避潜伏期及搜索距离明显延长(P＜0.05或P＜0.01，表1、2);在空间探索实验中，两组在原平台所在象限的搜索时间明显减少(P＜0.01，表3)，提示4-VO法建立VD大鼠学习记忆能力明显减退。(3)YDXNT+VD组与VD组比较，YDXNT+VD组在定位航行实验中逃避潜伏期及搜索距离缩短(P＜0.01，表1、2)，在空间探索实验中YDXNT+VD组原平台所在象限的搜索时间较VD组延长，(P ＜0.05或 P ＜0.01，表 1、2、3)，提示 YDXNT 对血管性痴呆引起的大鼠学习记忆的减退有一定的恢复作用。2.2 银丹心脑通软胶囊对血管性痴呆大鼠海马NPY表达的影响。光镜观察免疫组织化学切片，海马NPY免疫反应物质呈程度不等的棕黄色或棕褐色，主要分布于神经细胞胞浆，呈卵圆形、圆形或多角形，胞核呈蓝色，核仁清晰可见。MOD值越高说明表达越强，反映细胞内NPY表达量越多。统计学分析结果显示:VD模型组与针刺组大鼠海马NPY表达明显低于Sham组(P＜0.05，表4);其中VD组大鼠海马NPY表达又低于与Sham组比较;与VD模型组比较，YDXNT+VD组海马NPY表达明显升高(见表4)。

表2 空间探索距离组间比较± s，n=10)

表2 空间探索距离组间比较± s，n=10)

注:与sham组比较＊＊P＜0.01;与VD组比较△△P＜0.01

组别空间探索距离(cm)第1天 第2天 第3天 第4天05 315.62±26.87 VD组 2881.43±193.55＊＊ 2611.17±160.50＊＊ 2341.24±191.35＊＊ 1831.53±143.22＊＊YDXNT+VD组 2345.08±156.28＊＊△△ 1804.22±135.46＊＊△△ 1643.45±213.11＊＊△△ 900.64±132.39 sham组 1220.87±169.44 1203.42±158.73 620.41±100.＊＊△△

表3 空间探索实验中各组在原平台所在象限的搜索时间的比较 ± s，n=10)

表3 空间探索实验中各组在原平台所在象限的搜索时间的比较 ± s，n=10)

注:与sham组比较＊＊P＜0.01;与VD组比较△△P＜0.01

组别 空间探索时间(s)46.15±12.31 VD 组 18.23±5.54＊＊YDXNT+VD组 27.53±14.16 sham组＊＊△△

表4 银丹NP心Y脑通软胶囊对血管性痴呆大鼠海马表达的影响 ± s，n=10)

表4 银丹NP心Y脑通软胶囊对血管性痴呆大鼠海马表达的影响 ± s，n=10)

注:与sham组比较*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与VD组比较△△P＜0.01

组别85.66±8.45 VD 组 52.23±9.22＊＊YDXNT+VD组 75.42±7.58 MOD sham组＊△△

3 讨论

银丹心脑通软胶囊中的银杏叶、丹参、大蒜的有效成份结合能扩张血管，促进血液循环，预防和消除动脉粥样硬化;绞股蓝、灯盏细辛、三七、天然冰片有效成份联合能清除血液循环系统的垃圾，降低血脂及血黏度，修复受损脑组织，促进脑神经细胞的生长，防治脑梗死。银杏叶、大蒜、山楂、三七有效成份联合能快速缓解头晕、眼花、烦躁失眠等心脑血管病初期症状。近年来研究表明银丹心脑通软胶囊通过降血脂、抗炎等机制防治早期动脉粥样硬化［1］。芮铭安等［2］进一步发现银丹心脑通能使血浆比黏度、全血比黏度、红细胞比容降低。降低脑血管阻力，增加脑血流量;促进大脑半球经胼胝体的信息传递，可改善脑组织因缺氧造成的脑损伤，具有促进脑内代谢作用，对缺氧所致的逆行性遗忘有改进作用，可以增强记忆，提高学习能力，具有激活、保护和修复神经细胞的作用。银丹心脑通软胶囊能通过改变NPY的表达量来改善脑缺血缺氧造成的大鼠学习记忆能力下降。

［1］卢仁荣，陈晓曦.银丹心脑通软胶囊对冠心病患者血脂及高敏C反应蛋白的影响.中西医结合心脑血管病杂志，2008，6(9):1093-1094.

［2］芮铭安，孙赟，柏金喜，等.银丹心脑通软胶囊对PCI后心绞痛的疗效观察.中西医结合心脑血管病杂志，2008，6(1):87-89.