陈铁鑫

［摘 要］聚合酶链式反应（PCR）是江苏高考生物试题中的常考内容，PCR技术的用途并不局限于最初、最基本的获取目的基因。PCR技术的使用场景极其灵活，通过引物设计，可以达到融合基因、定点诱变等效果。文章对PCR技术中的引物设计思路进行分类，介绍其衍生的各种应用，为教师教学提供参考。

［关键词］PCR；引物设计；高中生物学

［中图分类号］    G633.91        ［文献标识码］    A        ［文章编号］    1674-6058（2024）14-0084-04

核心素养是高考命题和各类考试命题的指导方向和原则。为加深学生对基因工程大概念的理解，提升学生的生物学科核心素养，《普通高中生物学课程标准（2017年版2020年修订）》要求教师在基因工程的教学过程中开展“利用聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验”活动［1］。引物直接决定PCR的特异性与成功与否。人教版高中生物学选择性必修三中通过图片简单演示了PCR的基本过程，并未涉及引物设计，而近几年各地的高考试题为了响应新课标要求，基于核酸检测、DNA测序等真实情境，增加了许多与引物设计相关的技术困境内容。为跨越教材与实际应用的鸿沟，笔者对不同应用场景中的引物设计进行分析，以促进学生对PCR的理解，为教师教学提供参考。

一、以基因定位为目的的反向引物设计

以真核生物为受体细胞时，目的基因一般需整合至受体细胞的染色体DNA中，以实现稳定存在与表达。在上述情境中，为进行目的基因定位，需要在已知目的基因的附近逐步搜索并测序相邻的DNA区域，这就需要用到反向PCR。……