［摘 要］PCR技术是基因工程中获取和扩增目的基因的常用方法之一，其中常考查到的知识点有与引物相关的问题、酶切片段分析及变性、复性、延伸等环节的相关分析等。文章结合典型考题对这几个问题进行归纳分析。

［关键词］基因工程；PCR技术；常考知识点

［中图分类号］    G633.91        ［文献标识码］    A        ［文章编号］    1674-6058（2024）14-0080-04

【名师简介】曾凡洪，中学高级教师，武汉市学科带头人，曾担任高中生物奥赛主教练。先后在《生物学教学》《中学生物教学》《中学教学参考》《高中生学习》等报纸杂志上发表文章50余篇，并参与多本著作的编写。

聚合酶链式反应（PCR）是一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，其最大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大后进行比对，这也是“微量证据”的威力之所在。PCR的理论依据是DNA复制，一般的中学实验室很难具备相应的实验设备和操作条件，因此对于这块知识，基本上是以理论讲解为主。目前的一些考题涉及的PCR知识已经比较具体和深入了，具有一定的难度。本文结合典型考题对基因工程中PCR技术常考知识点进行归纳分析。

一、与引物相关的问题

引物是一小段单链DNA或RNA，是DNA复制的起始点。在引物的3＇—OH上，核苷酸以酯键形式进行加成，因此引物的3＇—OH必须是游离的。引物分为两种：存在于自然生物的DNA复制引物（RNA引物）和PCR中人工合成的引物（通常为DNA引物）。……