响应面法优化鱿鱼皮蛋白肽的制备工艺及其理化性质分析

2024-04-01朱清清马瑞娟陈剑锋谢友坪

食品工业科技 2024年7期

朱清清，马瑞娟，陈剑锋，谢友坪

（福建省海产品废弃物综合利用工程技术研究中心，福州市海产品高值化利用行业技术创新中心，福州大学，福建福州 350108）

鱿鱼（Loligospp.）属头足类海洋软体动物，体内含有丰富的蛋白质以及矿物质元素，具有生命周期短、生长快的特点[1]，是我国重要的远洋渔业捕捞种类之一。据统计，我国每年加工鱿鱼约在40～50 万吨[2]，鱿鱼加工已成为水产加工业的重要组成部分，其加工主要以胴体加工为主，鱿鱼头、足、内脏及表皮等下脚料一般被加工成鱼粉或被直接掩埋处理，造成资源的浪费和环境污染。鱿鱼皮是鱿鱼加工过程产生的主要下脚料之一，占总重10%左右[3]。鱿鱼皮中含有蛋白质、明胶、抗氧化色素、生物发光素及矿物质元素等物质[4]，其中蛋白质约占鱿鱼皮干重的88%，且胶原蛋白含量可高达30%[3]，是制备蛋白肽的优质原料。因此，如何高效利用鱿鱼皮制备蛋白肽对提高鱿鱼资源利用率、延伸鱿鱼加工产业链具有重要意义。

目前已有一些关于鱿鱼皮加工利用的报道，主要集中在胶原蛋白制备和活性物质提取等方面。Aleman 等[5]通过水解法从鱿鱼皮中提取了具有助消化功能的胶原蛋白。张国玉等[6]通过中性蛋白酶水解鱿鱼皮制备鱿鱼皮胶原蛋白肽粉，优化后的酶解条件为加酶量600 U/g、温度45 ℃、pH6.0、酶解时间4 h，得到的产物呈淡黄色粉末状，是一种低脂、低糖、高蛋白的肽粉。区兑鹏等[7]通过中性蛋白酶酶解鱿鱼皮，再通过热水法制备明胶，得到的最佳制备条件为酶添加量0.6%、酶解时间2 h，酶解温度40 ℃、提胶时间1 h、提胶温度75 ℃，经优化后明胶提取率可达20.807%。Ezquerra-Braue 等[8]从鱿鱼皮中提取制备了亲脂性物质，研究发现其具有显著抑制微生物的作用，可显著延长冷冻鳕鱼的保质期。Kao 等[9]以鱿鱼皮磷脂为原料制备了功能性鱿鱼皮脂质体，并对其抗炎作用进行了研究，证明了鱿鱼皮脂质体具有明显的抗炎作用。已有研究表明，对于同一酶解对象，采用不同的蛋白酶及酶解条件对其酶解产物的氨基酸组成、分子量分布、蛋白肽序列、抗氧化活性等具有明显影响，而这又决定了酶解产物的潜在应用价值[10]。然而，目前对于鱿鱼皮蛋白肽的研究主要集中在酶解工艺的优化上，鲜有对鱿鱼皮蛋白肽的理化特性进行较为全面的研究。

本研究以鱿鱼皮为原料，首先通过单因素实验考察酶种类、酶解时间、酶解温度、酶解pH、加酶量对多肽浓度和三氯乙酸可溶性氮指数（Trichloroacetic acid soluble nitrogen index，TCA-NSI）的影响。在此基础上，通过响应面分析法优化鱿鱼皮蛋白肽的制备工艺，并对其氨基酸组成、抗氧化活性、肽序列组成、模拟胃肠道消化等进行全面表征，以期为深度开发鱿鱼资源、实现加工下脚料的高值化利用提供一定参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

鱿鱼皮福州海汇生物科技实业有限公司提供；木瓜蛋白酶（800 U/mg）、风味蛋白酶（30 U/mg）、Gly-Gly-Tyr-Arg 四肽标准品上海源叶生物科技有限公司；碱性蛋白酶（200 U/mg）北京索莱宝科技有限公司；牛血清白蛋白德国Biofroxx 公司；胃蛋白酶（10 U/mg）、胰蛋白酶（50 U/mg）、酒石酸钾钠、五水合硫酸铜、乙腈、甲醇、三羟甲基氨基甲烷、盐酸、无水乙醇、氢氧化钠、三氯乙酸（Trichloroacetic acid, TCA）、邻苯三酚、水杨酸、石油醚、七水硫酸亚铁、抗坏血酸等国药集团化学试剂有限公司；2, 2-联苯基-1-苦基肼基（2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH）上海麦克林生化科技有限公司；2,2'-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2'-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid） diammonium salt，ABTS）上海阿拉丁生化科技股份有限公司；细胞色素C、抑酞酶、杆菌酶乙氨酸-乙氨酸-酪氨酸-精氨酸、马尿酸美国Sigma-Aldrich 公司。

HMT-15 水浴多工位磁力搅拌器天津市恒奥科技发展有限公司；UV-1700 紫外分光光度计、LC-16 高效液相色谱仪日本岛津公司；Sartorius BS 210S 电子天平德国Sartorius 公司；TGL-15B 高速台式离心机上海安亭科学仪器厂；Biochrom30+全自动氨基酸分析仪英国biochrom 公司；SHZD（III）循环水式多用真空泵河南予华仪器有限公司；EASY pureⅡ超纯水仪 Barnstead 公司；QExactive HF-X 质谱仪美国赛默飞公司。

1.2 实验方法

1.2.1 鱿鱼皮蛋白肽的制备鱿鱼皮解冻清洗后，将石油醚与鱿鱼皮按4:1 混合，常温下搅拌2 h，过滤后清洗沥干得脱脂鱿鱼皮。取5 g 脱脂鱿鱼皮，按1:5 比例加水，控制不同酶解条件于磁力搅拌水浴锅中酶解，结束后置沸水中灭酶10 min，冷却摇匀后离心（5000 r/min，10 min），取上清液为蛋白肽溶液，冷冻干燥后得鱿鱼皮蛋白肽。

1.2.2 酶解条件优化

1.2.2.1 蛋白酶筛选选用常见的蛋白酶，通过蛋白酶复配以增加酶切位点，进而提高鱿鱼皮蛋白质的酶解效率。以多肽浓度和TCA-NSI 为评价指标，按表1 条件筛选酶解效率最高的蛋白酶组合。

1.2.2.2 单因素实验以酶解温度50 ℃、pH8.3、加酶量5000 U/g、酶解时间120 min、料液比1:5、蛋白酶比例1:1 为基本条件。按顺序分别考察酶解时间（20、40、60、80、100、120 min）、酶解温度（35、40、45、50、55、60 ℃）、胰蛋白酶和碱性蛋白酶比例（4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4）、酶解pH（5、6、7、8、9、10）和加酶量（1000、2000、3000、4000、5000、6000 U/g）对多肽浓度和TCA-NSI 的影响，同时每个单因素实验结束后选用相应的最适条件进行后续的单因素实验。

1.2.2.3 响应面试验设计以TCA-NSI（%）为响应值，选取酶解温度、酶解时间、酶解pH 三个因素，按表2 的响应面试验设计进行酶解工艺优化。

表2 响应面试验因素水平设计Table 2 Factors and levels for response surface test

1.2.3 样品多肽浓度测定样品多肽浓度的测定参照鲁伟等[11]的方法。向酶解得到的蛋白肽溶液中加入等体积5% TCA（Trichloroacetic acid，TCA）溶液，混匀静置10 min 后离心（4000 r/min，15 min），取上清液用5% TCA 稀释10 倍，按3:2 的比例加入样品与双缩脲试剂，反应后离心取上清液于540 nm 测定吸光值，并参照标准曲线（y=0.1243x+0.0023，R2=0.997，以Gly-Gly-Tyr-Arg 四肽为标准试剂制作）计算样品的多肽浓度。

1.2.4 TCA-NSI 测定 TCA-NSI 测定参照马瑞娟等[12]的方法。先将酶解得到的蛋白肽溶液用等体积的15% TCA 溶液沉淀10 min，离心（4000 r/min，10 min）取上清液，按1:4 的比例加入样品与双缩脲试剂，反应30 min 后于540 nm 测定吸光值，参照蛋白标准曲线（y=0.0358x+0.0008，R2=0.999，以牛血清蛋白为标准试剂制作）计算样品中可溶性氮含量，再按下式计算TCA-NSI 值。

式中：m0为15% TCA 沉淀后上清液中的可溶性氮质量（mg）；m1为原料中总氮质量（mg），通过凯氏定氮法测定。

1.2.5 蛋白肽氨基酸组成及评价参照GB/T 5009.124-2016 测定鱿鱼皮蛋白肽的氨基酸组成及含量。根据联合国粮农组织/世界卫生组织（United Nations Food Agriculture Organization/World Health Organization，FAO/WHO）的氨基酸评分标准模式和全鸡蛋蛋白质的氨基酸模式，计算氨基酸评分（Amino acid score，AAS）、化学评分（Chemical score，CS）和必需氨基酸指数（Essential amino acid index，EAAI）[12-13]。

式中：aan，样品中必需氨基酸质量占总蛋白质量的比例；AAn，FAO/WHO 参考标准中必需氨基酸质量占总蛋白质量的比例。

1.2.6 蛋白肽分子量分布测定参照GB/T 22729-2008，采用高效液相色谱法测定蛋白肽分子量分布。

1.2.7 蛋白肽抗氧化能力测定

1.2.7.1 DPPH 自由基清除率的测定参考高群等[14]的方法：准确称量3.94 mg DPPH，配成0.1 mmol/L的DPPH 溶液，取2 mL 不同浓度（0.001、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8 mg/mL）多肽溶液和2 mL DPPH溶液混匀，室温下避光反应30 min，在517 nm 波长下测定吸光值，吸光值记为Ai，用无水乙醇和水分别替代DPPH 溶液和多肽溶液作为对照组和空白组，测得吸光度分别记为Aj和A0。以VC作为对照，评价其DPPH 自由基清除力。DPPH 自由基清除率计算公式如下：

1.2.7.2 ABTS+自由基清除率的测定参考葛珍珍等[15]方法：将5 mL 7 mmol/L 的ABTS 和88 mL 40 mmol/L 的K2S2O4混合之后，配制ABTS+母液，室温黑暗条件静置反应12 h 后，用纯水稀释溶液至其734 nm 吸光度值为0.70±0.02。取1.0 mL 多肽溶液（0.01、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8 mg/mL），加入稀释后的ABTS+溶液3.0 mL，室温反应30 min 后于734 nm 测定吸光值，记为As；以纯水替换ABTS+溶液和多肽溶液，测得吸光度分别记为Ac和A0。以VC作为对照，评价其ABTS+自由基清除力。ABTS+自由基清除率计算公式如下：

1.2.7.3 羟自由基清除率的测定参考马瑞娟等[12]方法：取1.0 mL 9.0 mmol/L FeSO4溶液、1.0 mL 9.0 mmol/L 水杨酸-乙醇、1 mL 8.8 mmol/L H2O2，分别加入1 mL 不同浓度的多肽溶液（0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg/mL）混合均匀，于37 ℃条件下水浴加热0.5 h，之后测定510 nm 处的吸光度，记为A1；以纯水替换H2O2以及多肽溶液，测得吸光度分别记为A2和A0。以VC作为对照，评价其羟自由基清除力。羟自由基清除率计算公式如下：

1.2.8 蛋白肽序列测定蛋白肽按1:10 加入去离子水溶解后，加入适量0.25%乙酸，混匀离心取上清液，转10 kDa 超滤离心管，12000 r/min 离心15 min。之后加入200 µL 0.25%乙酸，离心重复2 次，收集滤液，使用C18StageTip 脱盐，真空干燥，肽粉用0.1%甲酸溶液复溶，之后参考李小锋等[16]报道的LC-MS/MS 法测定并分析蛋白肽序列。

1.2.9 体外模拟胃肠道消化实验体外模拟胃肠消化实验参考李小峰等[16]的方法。体外模拟胃消化：取20 g 鱿鱼皮按1:5 加入去离子水，采用上述优化后的条件进行酶解，灭酶冷却后离心（5000 r/min，10 min），取上清液用HCl 将其pH 调至2.0，加入2%（E/S）的胃蛋白酶，于37 ℃反应2 h，灭酶冷却后离心（5000 r/min，10 min），取上清液测定自由基清除率。体外模拟肠消化：经胃蛋白酶酶解后，将酶解液的pH 调为8.5，加入2%（E/S）的胰蛋白酶，于37 ℃反应2 h，灭酶冷却后离心（5000 r/min，10 min），取上清液测定自由基清除率。

1.3 数据处理

所有实验设置3 组平行实验，结果以“平均值±标准差”的形式表示，采用Duncan 检验进行显著性统计分析，P＜0.05 表示差异显著，响应面试验设计、数据统计分析和作图分别采用Design-Expert V 8.0.6、SPSS 22.0 和Origin 9.0。

2 结果与分析

2.1 蛋白酶的筛选和单因素实验结果分析

如图1（A）所示，在6 种蛋白酶组合中，碱性蛋白酶与胰蛋白酶的组合对鱿鱼皮的酶解效果最佳，而风味蛋白酶与碱性蛋白酶的水解效果最差。这可能是由于胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶均为内切酶，且酶切位点各不相同[17]，因此通过复合这些蛋白酶可提高鱿鱼皮蛋白质的酶解效果。而风味蛋白酶的酶切位点是内切和外切组合[18]，内切酶作用于分子内部肽键，将蛋白质分子断裂为多肽片段，而外切酶主要作用于蛋白质或多肽的分子末端，产生游离氨基酸，因此在相同加酶量的条件下，复合酶中包含外切酶位点的蛋白酶会使得酶解产物中多肽减少而游离氨基酸增多，从而导致酶解效果差于其他酶。因此，选择胰蛋白酶和碱性蛋白酶复合作为酶解用酶。

图1 不同酶解条件对多肽浓度和TCA-NSI 的影响Fig.1 Effects of different enzymatic conditions on peptide concentration and TCA-NSI

由图1（B）可知，酶解时间对酶解效果的影响呈现先升高后降低的趋势，在酶促反应前80 min 内，底物蛋白较为充足，多肽浓度和TCA-NSI 均呈现迅速升高趋势，当酶解超过80 min 后可能由于底物蛋白所剩无几，蛋白酶可将多肽进一步酶解为游离氨基酸，因此酶解效率大幅度下降[19]，这与王熙等[20]的研究结果相似。因此，选择酶解时间为80 min 用于后续实验。由图1（C）可知，在35～45 ℃范围内，温度提高有利于激活底物与酶作用活性位点，从而增强酶促反应[21]，而当温度超过45 ℃后，会破坏蛋白酶的活性中心，导致酶解效率下降[22]。因此，选择酶解温度为45 ℃用于后续实验。由图1（D）可知，当胰蛋白酶和碱性蛋白酶比例为2:1 时其酶解效率最高，主要原因可能是胰蛋白酶的酶切位点较少（Arg-，Lys-），而碱性蛋白酶的酶切位点较多（Ala-、Leu-、Val-、Tyr-、Phe-、Try-）[17]，当碱性蛋白酶比例过低时会使得酶解不充分，而当碱性蛋白酶比例过高时，则会导致底物过度酶解，蛋白肽更易被进一步水解为游离氨基酸。因此，选择胰蛋白酶与碱性蛋白酶比例为2:1 用于后续实验。由图1（E）可知，多肽浓度和TCA-NSI 在pH5～10 内呈现先上升后降低的趋势，在pH 为8.0 时多肽浓度和TCA-NSI 均达最大值，原因可能是由于酶的蛋白构象易受H+和OH-浓度变化的影响，并且H+和OH-会对蛋白酶活性位点功能基团的解离产生影响，进而影响酶促反应效率[23]。因此，选择酶解pH 为8.0 用于后续实验。由图1（F）可知，当底物浓度一定时，蛋白酶浓度的提高有利于增加底物蛋白与酶分子中活性位点的碰撞几率，从而加速酶促反应，但当酶添加过量后，会使得部分多肽被彻底酶解成氨基酸[23-24]。因此，选择酶添加量为4000 U/g 用于后续实验。

2.2 响应面试验结果分析

2.2.1 响应面模型建立与分析由于采用不同的复合酶比例及加酶量，其最佳的酶解温度、酶解时间、酶解pH 也会随之改变，因此本研究在单因素实验确定的最适复合酶比例（2:1）及加酶量（4000 U/g）的基础上，以TCA-NSI（Y）为响应值，选取酶解温度（A）、酶解时间（B）、酶解pH（C）为自变量，进行响应面试验设计，其结果如表3 所示。经回归拟合后，得到Y 与A、B、C 之间关系的回归方程如下：Y=87.49-7.47A+4.13B-4.70C+3.85AB+1.50AC-5.75BC-6.68A2-6.49B2-11.37C2。由表4 可知，该拟合模型的P值＜0.0001，决定系数R2=0.9879，调整决定系数R2Adj=0.9723，失拟项P=0.3273＞0.05 不显著，说明该模型拟合程度较好，说明所选的3 个因素对鱿鱼皮酶解效果有明显影响，由各因素的均方值可知，各因素对水解度的影响顺序为：酶解温度（A）＞酶解pH（C）＞酶解时间（B）。由图2 可知，所选三个因素在研究范围内都呈现先上升后下降的趋势，且从这3 个因素的交互作用中可以看出，酶解时间（B）和酶解pH（C）交互作用最强，其次是酶解温度（A）和酶解时间（B），而酶解温度（A）和酶解pH（C）的交互作用最弱。

图2 酶解温度、酶解时间和酶解 pH 两两交互对 TCA-NSI影响的响应面图Fig.2 Response surface plots of the interactive effect of temperature, time and pH on TCA-NSI

表3 响应面试验方案及结果Table 3 Design and results of response surface test

表4 响应面模型的方差分析Table 4 ANOVA of the response surface model

2.2.2 验证实验由Design-Expert 软件预测鱿鱼皮蛋白肽的最佳制备条件为：温度43.38 ℃、时间100 min、pH7.52，TCA-NSI 的预测值为88.23%。为方便实际操作，选择温度43.50 ℃、时间100 min、pH7.50 进行验证，在此条件下，TCA-NSI 值为89.02%±0.66%。预测值与实际结果相对误差为0.90%。以上结果说明，通过响应面试验得到的酶解鱿鱼皮工艺条件具有较高的可信度。

2.3 鱿鱼皮蛋白肽氨基酸组成与评分

鱿鱼皮蛋白肽中共包含17 种氨基酸（表5），总氨基酸含量为83.05 g/100 g，其中含有7 种必需氨基酸，含量为27.70 g/100 g，其必需氨基酸指数EAAI为0.90（表6）。研究表明，当EAAI 值为0.86～0.95时可表示蛋白质量良好[25]。因此，以上结果说明所制备鱿鱼皮蛋白肽的必需氨基酸组成相对均衡，且营养价值较高。此外，由CS 和AAS 可知（表6），Ile 和Lys 为其限制性氨基酸，因此若将该蛋白肽用作饲料或者食品添加剂时，可根据实际营养需求额外补充Ile 和Lys。

表5 鱿鱼皮蛋白肽的氨基酸组成Table 5 Amino acid composition of squid skin peptides

表6 鱿鱼皮蛋白肽的必需氨基酸含量及氨基酸评分Table 6 Essential amino acid content and amino acid score ofsquid skin peptides

2.4 鱿鱼皮蛋白肽的分子量分布

从表7 可以看出，鱿鱼皮蛋白肽的分子量主要分布在180～3000 Da，占比高达99.64%，表明鱿鱼皮经酶解后产物中主要为小分子肽，而小分子肽具有易吸收、吸收过程不需要额外能量、对肠胃亲和性高等特性[26]，因此具有较高的潜在应用价值。

表7 鱿鱼皮蛋白肽的分子量分布Table 7 Molecular weight distribution of squid skin peptides

2.5 鱿鱼皮蛋白肽抗氧化性分析

由图3 可知，随鱿鱼皮蛋白肽浓度增大，其DPPH 自由基清除率、ABTS+自由基清除率、羟自由基清除率均增加，呈明显的正相关性，其半抑制浓度（IC50）分别为0.61、0.28 和1.95 mg/mL。相关研究表明，当IC50低于10 mg/mL 时，则可说明其具有良好的抗氧化性[27]。因此，以上结果表明所制备的鱿鱼皮蛋白肽具有较强的抗氧化性。

图3 不同质量浓度的鱿鱼皮蛋白肽和抗坏血酸对自由基清除率的影响Fig.3 Effects of different concentrations of squid skin peptides and ascorbic acid on free radical scavenging

2.6 鱿鱼皮蛋白肽序列分析

从鱿鱼皮蛋白肽中鉴定出43 种肽段（表8），其中38 个肽段的分子量低于1800 Da。研究表明，分子量介于500～1800 Da 的肽段对自由基有更强的清除能力[28]，原因是短肽能暴露出更多具有抗氧化能力的氨基酸残基[29]。此外，鱿鱼皮蛋白肽中含有10.10%芳香族氨基酸（表5），且有16 个肽段中的疏水氨基酸超过一半，分别有58.14%和48.84%的多肽序列在其N 端和C 端存在疏水性氨基酸。通常疏水性氨基酸残基能提高肽链在非极性溶剂中的溶解性，增强肽链与脂质自由基亲和力，进而减少自由基对机体细胞的氧化作用[30-31]，而芳香族氨基酸是良好的供电子体，使自由基从不稳定状态转变成稳定状态[32]。同时，当疏水性氨基酸位于肽段序列的C 端或N 端时更有助于提高肽段的抗氧化活性[33-34]。因此，以上结果进一步证实了所制备的鱿鱼皮蛋白肽具有较强的抗氧化活性。

表8 鱿鱼皮蛋白肽的LC-MS/MS 序列鉴定结果Table 8 LC-MS/MS sequence identification results of squid skin peptides

2.7 体外消化实验结果分析

由表9 可知，在胃消化阶段，鱿鱼皮蛋白肽中分子量大于3000 Da 的部分被完全酶解，因此该阶段主要是将较大肽段进一步分解；而在肠消化阶段，分子量在500～3000 Da 的肽段则被完全酶解成更易吸收的小肽以及氨基酸。如图4 所示，经模拟胃肠消化后，鱿鱼皮蛋白肽对DPPH 自由基和羟自由基的清除活性呈先升高后降低的变化趋势，原因可能是模拟胃消化过程使得蛋白肽暴露出更多的疏水性氨基酸侧链，从而有利于提高蛋白肽对DPPH 自由基和羟自由基的清除活性[35]；而模拟肠消化过程可将多肽进一步酶解，导致多肽内部空间结构发生变化，进而使得相应的抗氧化活性位点减少[36]。相反地，ABTS+自由基清除率则呈现先降低后上升的趋势，原因可能是不同pH 条件会引起蛋白肽结构变化，导致蛋白肽与ABTS+自由基的相互作用方式发生改变，从而影响其抗氧化能力；同时在酸性条件下，蛋白肽可能更容易发生氧化反应，如生成二硫键或氧化脱氨酸等，这些氧化反应可能会降低蛋白肽的抗氧化能力，导致其对抗ABTS+自由基的能力下降[37]。

图4 模拟胃肠消化对鱿鱼皮蛋白肽抗氧化活性的影响Fig.4 Effect of simulated gastrointestinal digestion on antioxidant activity of squid skin peptides

表9 模拟胃肠消化对鱿鱼皮蛋白肽分子量分布的影响（%）Table 9 Effect of simulated gastrointestinal digestion on the molecular weight distribution of squid skin peptides (%)

3 结论

本文以鱿鱼皮为原料，通过单因素和响应面试验优化了鱿鱼皮蛋白肽的酶解制备工艺，得到的最佳条件为：酶解温度43.50 ℃、酶解时间100 min、酶解pH7.50、胰蛋白酶与碱性蛋白酶比例为2:1、加酶量4000 U/g，在此条件下TCA-NSI 可达89.02%±0.66%，所制备的鱿鱼皮蛋白肽氨基酸组成均衡，EAAI 值为0.90。LC-MS/MS 测序结果表明鱿鱼皮蛋白肽中含有43 个多肽序列，其中38 个肽段的分子量低于1800 Da，且有16 个肽段中的疏水氨基酸超过一半，分别有58.14%和48.84%的多肽序列在其N 端和C 端存在疏水性氨基酸，使得鱿鱼皮蛋白肽对DPPH 自由基、ABTS+自由基和羟自由基清除率的IC50可分别达0.61、0.28 和1.95 mg/mL。经体外模拟胃肠消化后，鱿鱼皮蛋白肽可被降解为分子量更小的肽段，同时仍能维持较好的抗氧化活性。本实验为鱿鱼皮蛋白肽的制备及应用提供了实验依据。