李 茜，李心怡，李小静，朱晓璇，丁以春

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protien acidic and rich in cysteine，SPARC)是一种胶原结合蛋白，能够影响胶原细胞外基质的组装和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的活性[1]。研究[2]表明，SPARC在多种纤维性病变组织中均呈现高表达。瘢痕疙瘩是一种病因不明的皮肤纤维过度增生性疾病，与肺、心脏纤维化等纤维性疾病具有相似的胶原细胞外基质组装和TGF-β活化过程。课题组先前的研究[3-4]表明病理性瘢痕中SPARC表达高于正常皮肤；经外源性SPARC处理的HKF显示出明显的增殖迹象，在兔耳瘢痕中注射SPARC，其成纤维细胞增殖和胶原沉积明显增加。先前研究表明SPARC与瘢痕疙瘩的形成具有相关性，但具体的作用机制仍不清楚。

该研究构建了SPARC慢病毒干扰载体感染HKF，观察沉默SPARC基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学特性的影响。同时，拟通过检测细胞中TGF-β1及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)的蛋白表达情况，初步探讨形成这一影响的机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料重组慢病毒LV2N-NC和LV2N-shRNA-SPARC干扰载体由上海吉玛基因生物技术有限公司合成并鉴定，在293 T细胞中进行包装及滴度测定。DMEM培养基、胎牛血清(美国Gibco公司)，TRIzol试剂、逆转录试剂盒(日本TaKaRa公司),MTT试剂、AnnexinV-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)，兔抗人TGF-β1、 TGF-β ReceptorⅠ抗体、重组人SPARC蛋白(美国R&D公司)。5例组织标本来自安徽医科大学第一附属医院整形外科，手术切除的典型瘢痕疙瘩(其中耳垂3例，肩部2例)，取材标本术前均未接受药物及其他治疗且均获得本人或其监护人同意。

1.2 方法

1.2.1细胞培养 将瘢……