冉思邈，夏 婧，夏乐旋，王 平

失眠是以频繁而持续的入睡困难和睡眠维持困难并导致睡眠感不满意为特征的一种睡眠障碍。各种原因导致的睡眠不足均对健康有着负面影响[1]。严重的睡眠障碍不仅影响患者的身心健康，也影响了患者的生活和工作质量，长期失眠对个人和社会造成了严重的负担[2]。

斑马鱼与人类基因高度同源，可以通过光照、咖啡因、持续流动水流、感官刺激、电刺激、物理摇晃等方式对斑马鱼进行睡眠剥夺[3-7]，但目前尚未见斑马鱼成鱼失眠模型的报道。该研究探索建立一种斑马鱼成鱼失眠模型，并通过比较睡眠剥夺后斑马鱼的运动行为、学习记忆能力、生物钟基因表达和脑部超微结构的改变进行评价，以期为失眠的机制和动物模型研究提供借鉴和参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物4月龄同批次野生型AB系雄性斑马鱼160尾，购自国家斑马鱼资源中心，饲养在湖北中医药大学老年医学研究所斑马鱼实验室，房间内温度为(28.5±1)℃，光照条件为14 h光照，10 h黑暗，用自动计时器设置每天8:00开灯，22:00关灯，养鱼水pH值在7.0～8.0之间，导电率在450～500 μs/cm之间。每天早晚饲喂孵化好的丰年虾各1次。

1.2 主要试剂与仪器荧光定量试剂盒、逆转录试剂盒(日本TaKaRa公司)，集中式斑马鱼养殖系统(青岛金水海洋生物设备有限公司)，净水供水单元(上海海圣生物实验设备有限公司)，斑马鱼行为分析系统、T迷宫行为学追踪系统(法国View Point Life Sciences公司)，PCR仪器(美国Bio-Rad 公司)。

1.3 方法

1.3.1造模方法 将160尾雄性斑马鱼随机分为对照组(n=20，记为CK组)和睡眠剥夺组(n=140，记为SD组)，睡眠剥夺组分别设置不同剥夺时长(1～7 d)的亚组，即SD1、SD2、SD3、SD4、SD5、SD6和SD7组。……