miR-34a在过敏性鼻炎小鼠中表达及治疗的作用研究
2022-07-13谢伟伟林秀联
谢伟伟,林秀联,龙 绮,孟 光,刘 硕
过敏性鼻炎属于鼻黏膜的变应性和炎症性疾病。其主要发病机制为患者暴露于变应原,从而介导IgE释放介质,激活多种免疫活性细胞释放细胞因子参与发病过程[1]。临床表现为鼻痒、鼻塞、打喷嚏和流清涕等,显著影响患者生活质量。然而目前尚不完全明确发病机制,药物治疗仅能缓解患者80%左右的症状。加之过敏性鼻炎极易复发,病情反复,给临床治疗带来一定障碍[2]。因此,深入探索过敏性鼻炎的特异性标志物及寻找可靠有效的治疗靶点显得极为重要。近年研究[3]显示微小RNA(microRNA,miR)参与了过敏性鼻炎发生发展过程。其中,miR-34是一类研究较多的miR分子,在多种炎性疾病发病中发挥重要作用,可促进炎症反应失衡[4-5],促炎因子表达上升,抑炎因子表达下调[6],但miR-34在过敏性鼻炎中表达罕见报道。因此,该研究旨在通过qRT-PCR检测过敏性鼻炎小鼠外周血miR-34a的表达水平,并采用miR-34抑制剂及阴性对照干预过敏性鼻炎小鼠,观察其对小鼠症状及炎症反应的影响。
1 材料与方法
1.1 材料40只5~6周龄的SPF级BALB/c 小鼠,雌雄各20只,体质量18~22 g;该研究中的动物实验得到武汉大学人民医院动物伦理委员会的批准。卵清蛋白(OVA)购自美国Sigma公司,ELISA试剂盒购自美国R&D公司,血浆/血清RNA纯化试剂盒(GenEluteTM Plasma/Serum RNA Purification Mini Kit)购自美国Sigma公司,两步法实时定量PCR试剂盒(QuantiTect Reverse Transcription Kit)购自美国Qiagen公司,miR-34a抑制剂购自广州锐博生物科技有限公司,NanoDrop 微量分光光度计购自美国Thermo Fisher Scientific公司,ABI 7500 qRT-PCR购自美国Applied BioSystems公司,流式细胞仪购自美国贝克曼库尔特公司,miR-34a和炎症因子的引物序列购自上海生工生物工程股份有限公司。……
