樊星语，胡冰琪，黄俊峰，杨 英，刘欢欢，张 浩，王 琴，周 强，陈礼文

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是重要的公共健康问题，感染人体后表现为急、慢性乙型肝炎，肝硬化和肝细胞癌等[1]。尽管可使用有效的疫苗预防，但在全球范围内尚未成功根除 HBV。PTEN是重要的抑癌基因，在人类很多癌症(如肺癌、卵巢癌、甲状腺癌、肝癌等)中发生突变或缺失，几乎一半的肝癌患者存在PTEN基因的缺失[2]。有研究[1]显示，PTEN的磷酸酶活性正向调节干扰素调节因子3(IRF3)进入细胞核，发挥促进先天免疫反应作用，且此结果在HBV感染的细胞中得到了验证。但HBV感染后IFN-α介导的JAK/STAT信号通路与PTEN间的关系尚未完全清楚。该研究旨在分析HBV感染后PTEN下调所致的IFN-α的抗病毒活性变化机制，为研究抗HBV感染提供线索。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器HepG2细胞、HepG2.2.15细胞、HBV1.3质粒、空白载体(pcDNA3.1)由安徽医科大学第二附属医院检验科留存；PTEN-OE质粒、RNA抽提试剂(TRIzol)、引物序列购自上海生工生物公司；DMEM、0.25%胰蛋白酶购自美国Gibco公司；胎牛血清(FBS)、遗传霉素G418、双抗(×100青-链霉素溶液)、PBS购自美国 HyClone公司；BCA蛋白浓度检测试剂盒购自上海碧云天生物公司；抗PTEN、IRF9、MxA等抗体购自英国Abcam公司；抗GAPDH、山羊抗兔/鼠IgG抗体购自美国Affinity公司；LipofectamineTM3000 转染试剂购自美国 Invitrogen 公司；poly(I ∶C)购自美国GLPBIO公司；ECL底物发光试剂盒购自美国Pierce公司；RNA反转录试剂盒、荧光染料SYBR购自美国Thermo Fisher Scientific公司。

1.2 方法

1.2.1细胞培养和转染 HepG2、HepG2.215细胞采用含10%FBS、1%双抗的DMEM培养，其中HepG2.2.15 细胞的每100 ml培养基中加入320 ng遗传霉素G418，培养条件为37 ℃ 、5%CO2，待细胞生长至 90% 融合时，用胰蛋白酶消化1～2 min，1 ∶3传代培养。待细胞至对数生长期，将胰蛋白酶消化的细胞均匀铺至细胞培养板，待细胞融合至70%～80%时使用新鲜培养基换液后进行转染。……