陈宗跃，张璟钰，张敏琴，樊双琴，沈祥春，陈 妍，张 玥

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，75%的恶性乳腺肿瘤患者呈现雌激素受体α(estrogen receptor-α，ERα)阳性[1]。他莫昔芬(tamoxifen, TAM)是原发性ERα阳性乳腺癌的核心治疗药物，临床数据显示约50%的反应性乳腺肿瘤因长期使用TAM而产生抗性并导致治疗失败[2]。低氧诱导因子1α(hypoxia induced factor 1α, HIF-1α)是细胞在低氧状态下稳定表达的核转录因子[3]，其可调控多种耐药靶基因的表达从而致使肿瘤细胞的化疗耐药。目前已有研究[4]表明HIF-1α水平升高与多种恶性肿瘤耐药有关，但其与乳腺癌TAM耐药的关系目前尚不明确。因此，该研究采用TAM的活性代谢物4-羟基他莫昔芬(4-hydroxy tamoxifen，4-OHT)构建乳腺癌TAM耐药细胞模型，探讨HIF-1α与乳腺癌TAM耐药的关系，为攻克乳腺癌耐药问题寻找新的靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂人乳腺癌细胞MCF-7购自中国科学院昆明细胞库；4-OHT购自美国Abcam公司；FG-4592及LW6均购自上海MedChem Express公司；MTT购自北京索莱宝公司；胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)，DMEM高糖培养基购自美国Gibco公司；si-HIF-1α和阴性对照si-NC序列均购自上海吉玛公司，Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；凋亡检测试剂盒购自江苏凯基生物技术股份有限公司；抗HIF-1α购自美国Sigma公司；β-actin单克隆抗体购自美国Bioworld公司；二抗羊抗兔/羊抗鼠购自上海斯信生物科技有限公司；一抗稀释液/二抗稀释液均购自上海碧云天生物有限公司。

1.2 主要仪器LDZX型立式高压蒸汽灭菌锅购自上海申安医疗器械厂；SW-CJ-1型超净工作台购自苏州净化设备有限公司；Heal force型细胞培养箱购自上海力申科学仪器有限公司；CFX型凝胶成像系统购自美国Bio-rad公司；……