张先茂 颜庭林

摘 要：本文应用DNA条码技术，研究通用引物，扩增动物源性加工食品中线粒体基因COI，开发检验快速、准确、低成本和高通量的食品中动物源性成分的快速检测方法。结果表明，该方法有很好的特异性，最低检出限为0.10 ng/µL，可以对未知、已知动物源性成分的食品进行快速、准确的定性、定量检测。

关键词：DNA条码技术;高通量快速检测;动物源性成分;通用引物

Rapid Detection of Animal Derived Ingredients in High Throughput Food Based on DNA Barcode Technology

ZHANG Xianmao， YAN Tinglin

（Gansu Province Product Quality Supervision and Inspection Research Institute， Lanzhou 730050， China）

Abstract： In this paper， DNA barcode technology is used to study universal primers to amplify the COI of mitochondrial genes in animal-derived processed foods， and to develop a rapid， accurate， low-cost and high-throughput rapid detection method for animal-derived components in food. The results show that the method has good specificity， the minimum detection limit is 0.10 ng/µL， and it can perform rapid and accurate qualitative and quantitative detection of food with unknown and known animal-derived components.

Keywords： DNA bar code technology; high throughput rapid detection; animal derived ingredients; universal primers

DNA条形码技术是近年来新兴的DNA分子检测技术[1]。不同于传统的分子检测技术，DNA条形码以一对通用引物扩增物质的线粒体基因COI标准序列，通过序列内碱基的多样性对已知和未知的成分进行识别，且这种技术已逐渐应用于食品领域[2]。在动物源性食品中，线粒体基因COI已成为动物物种鉴定中公认的理想DNA条形码片段。由于DNA分子的热稳定性，DNA条码技术在加工肉类食品中鉴定动物源性成分、标签符合性查验等方面被广泛应用[3-5]。

目前对肉类加工食品中未知动物源性成分的检验还处于空白阶段，传统的Sanger测序技术仅能对已知动物源性成分进行检验，在对多种未知动物源性成分的检验方面还存在不足。本实验应用DNA条码技术，结合纳米技术，开发能快速、准确检测食品中动物源性成分的检验方法。

1 材料与方法

1.1 材料

动物源性食品来源：熟制牛肉、熟制羊肉、熟制鸭肉、熟制鸡肉、熟制猪肉和熟制牦牛肉购自兰州某大型超市，-18 ℃保存;熟制马肉购自甘南藏区。

1.2 试剂

动物源性成分DNA提取试剂盒（天根生物科技有限公司，包括DNA裂解液;PCR緩冲液 10X;dNTP 10X;Tap酶5 U/µL）;琼脂糖（Sigma）;GEL-Red（碧云天生物科技有限公司，