CEA阳性细胞系的鉴定及其荷瘤小鼠模型建立
2021-12-28吕开绩张丽芳卢叶挺王高卿周新华
吕开绩,张丽芳,卢叶挺,王高卿,周新华
CEA是一种来源于机体内胚层上皮组织的糖蛋白,正常情况下人体血清中的CEA 含量极低。一旦正常机体出现肿瘤细胞异常增生时,CEA 会失去极性,之后过度表达。之后,在磷脂酶作用下,细胞表面的CEA 可以进入血清,导致血清CEA 的增加。目前临床上常规检测血清CEA 含量以动态观察肿瘤的发生发展。CEA 可以在某些恶性肿瘤包括结肠直肠癌、胃癌[1-2]、肺癌[3-4]、胰腺癌[5]和其他癌症中过度表达。其在癌细胞粘附、迁移和侵袭中起着重要作用。因此,CEA 已经成为免疫治疗的靶标。本研究分别选取了人大肠癌细胞株HT-29、人胃癌细胞株M KN-45 及人宫颈癌细胞株Hela,利用RT-PCR、Wesern Blot 以及免疫荧光对3 种细胞株中的CEA 表达情况进行验证;随后利用3 种细胞分别建立荷瘤小鼠模型,为CEA 阳性肿瘤的发病基础以及治疗提供了肿瘤模型基础。
1 资料与方法
1.1 材料及试剂 人大肠癌细胞株HT-29、人宫颈癌细胞株Hela 购自上海中科院细胞库,人胃癌细胞株 MKN-45 购自中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。细胞培养基Basic RPMI-1640、DMEM、胎牛血清(FBS)、EDTA-胰酶购自Gibco 公司。CEA多抗购自abcam 公司。细胞培养用6 孔板、24 孔板、小号培养皿、细胞冻存管购自康乐实验器材公司。4~5 周龄,健康未孕的雌性BALB/c-nu小鼠,体质量10~15 g,18 只,购自南京生物医药研究院,按照GB-14924.3-2001/GB14924.2-2001 营养标准配制小鼠饲料,IVC-II 型独立通风系统,保持恒定温度(22±2℃)和湿度(40%~70%),饮用水均为高压灭菌水,每日光照与无光照各12 h 饲养于温州医科大学动物实验中心SPF 级实验室。
1.2 方法
1.2.1 RT-PCR 设计CEA引物:上游引物序列为:5’ATGGAGTCTCCCTCGGCCCCTC3’;下游引物序列为:5’ATCTGACTTTATGACGTGTAGGG3’,由擎科生物公司进行合成。……
