王燚伟，田永利，马广恩，张永占

(秦皇岛市第一医院关节骨科，河北 秦皇岛 066001)

骨关节炎是中老年人常见的慢性退行性关节病变，病因复杂且发病机制未完全阐明，至今仍缺乏特效的治疗手段。关节软骨细胞损伤在骨关节炎的发病中起重要作用，表现为软骨细胞数量减少、细胞外基质合成及分解紊乱。近些年，微小RNA(microRNA，miR)在软骨细胞损伤中的作用受到越来越多关注，不同的miRs可能通过调控细胞凋亡、炎症反应、氧化应激等环节在骨关节炎的发病过程中引起软骨细胞损伤[1-3]。国内殷春明等[4]的一项临床研究证实，骨关节炎患者关节液中miR-140-3p的表达水平呈降低趋势，且关节病变越重miR-140-3p表达越低；Wang等[5]的研究在椎间盘退行性改变中证实miR-140-3p具有保护作用。基于此提出假设，骨关节炎发病过程中miR-140-3p起软骨细胞保护作用，其表达降低会削弱保护作用并引起或加重软骨细胞损伤。为了验证这一假设，本研究以白细胞介素(interleukin，IL)-1β诱导软骨细胞损伤模型为对象，通过细胞存活、细胞凋亡及相关基因表达的检测分析了miR-140-3p的生物学作用及机制，旨在为阐明miR-140-3p在骨关节炎发病中的作用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞株 大鼠骨关节软骨细胞株ATDC5(中科院上海细胞资源中心，中国)。

1.2 试剂 IL-1β(Sigma公司，美国)；miR-140-3p及阴性对照(NC)miR、阴性对照腺病毒(Ad-NC)及过表达Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associatal X protein，BAX)的腺病毒(Ad-BAX)(上海吉凯公司，中国)；miR提取、反转录及荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)检测试剂盒(北京天根生化公司，中国)；四唑化合物[3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium，MTS]法细胞存活检测试剂盒(Biovision公司，美国)；……