刘俊枫， 伏 慧， 刘 翔， 王 文， 马 红， 臧一铭， 贾 伟， 李 刚

艰难梭菌（Clostridium difficile）是一种主要通过粪-口途径传播的专性厌氧的粗大革兰阳性芽孢杆菌，是院内导致胃肠炎相关感染的重要原因[1]。临床艰难梭菌感染主要引起患者腹泻不适，严重者可导致伪膜性肠炎、中毒性巨结肠、肠坏死，甚至危及生命[2]。本研究旨在了解宁夏医科大学总医院住院腹泻患者艰难梭菌感染情况，同时对分离菌株进行毒素基因检测及多位点序列分型（MLST），探讨本地区菌株流行病学特点，为艰难梭菌监测提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本收集 收集 2019年1月1日—2020年12月1日此院住院患者腹泻粪便标本。纳入标准：根据2017年美国传染病学会和美国医疗保健流行病学学会颁布的成人和儿童艰难梭菌感染临床实践指南[3]，24 h内出现过≥3次包括稀便、糊状便或水样便患者。排除标准：使用导泄剂或灌肠的患者。本研究已通过医院伦理委员会审批（伦理审批号 ：2020-864）。

1.1.2 主要仪器与试剂 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF MS）、厌氧产气袋（法国生物梅里埃公司），Bugbox厌氧培养箱（英国Ruskinn 公司），艰难梭菌选择性培养基、哥伦比亚血琼脂平板（英国OXOID公司），Premix Taq酶（中国天根有限公司），引物合成及PCR产物测序由上海生工有限公司完成。

1.2 方法

1.2.1 艰难梭菌厌氧培养及鉴定 将患者约0.5 g粪便标本与95%乙醇等体积混匀，室温放置30 min后，6 000 r/min离心5 min，取沉渣接种于艰难梭菌选择性培养基，置于35℃厌氧培养箱中，培养48 h，挑取黄色、扁平、边缘不规则、具有特殊臭味的典型菌落，进行质谱仪鉴定到种。……