黄德发，陈 杰，杨 通，李正哲，张文娟，焦志刚，钟田雨，

（1. 赣南医学院第一临床医学院，江西赣州 341000；2.赣南医学院第一附属医院检验科，江西赣州 341000）

外泌体是一种由细胞分泌的双层膜结构小囊泡，直径40～150 nm，它们广泛存在于血液、尿液、母乳、腹腔积液、羊水、唾液和脑脊液等[1-2]。外泌体通过携带蛋白质和核酸等多种生物分子参与细胞间通讯，从而调节机体的生理、病理过程[3]。越来越多的研究表明外泌体可以用于疾病的诊断和治疗[4-5]。外泌体的分离和鉴定对于研究其生物学及临床应用功能是最基础也是最关键的步骤。目前，外泌体常用的分离方法包括超速离心法、密度梯度离心法、免疫吸附法、沉淀法及尺寸排阻色谱法等[6-8]。本研究拟选择超速离心法、沉淀法和尺寸排阻色谱法提取并鉴定血清外泌体，旨在验证采用不同方法提取血清外泌体的得率和纯度，为后续外泌体的研究和应用提供参考依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象 随机选取2021年1月～3月赣南医学院第一附属医院健康体检者8 例，其中男性4 例、女性4 例，年龄20～40 岁，所有体检者体检结果均在参考区间内。使用普通真空采血管采集受试者静脉血10 ml，室温静置30 min 使血液凝集。将采集血液在4℃ 1 500×g 离心20 min，取上清，上清液在4℃ 3 000×g 离心15 min，收集上清（血清）每管1 ml，-80℃保存。所有受试者均签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 外泌体提取试剂盒（MA0404）（沉淀法）购自大连美仑生物技术有限公司，尺寸排阻色谱柱（EXOSEC1.0-3）购自辽宁润基生物科技有限公司，Millipore 超滤管(UFC810096)购自北京华力德科技有限公司，Pierce™ BCA 蛋白检测试剂盒（23227）购自Thermo Fisher Scientific 公司，Triton X-100（T8200）购自北京索莱宝科技有限公司。……