刘 伟，白 婧，尹可欣，韩喜荣，施丽飞（北京市海淀区疾病预防控制中心，北京 100094）

致泻大肠埃希氏菌（diarrheagenic Escherichia coli, DEC）是一类能引起人体以腹泻症状为主的大肠埃希氏菌，可经过污染食物引起人类发病。常见的DEC主要包括肠道致病性大肠埃希氏菌（EPEC）、肠道侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）、产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）、产志贺毒素大肠埃希氏菌（STEC）[包括肠道出血性大肠埃希氏菌（EHEC）]和肠道集聚性大肠埃希氏菌（EAEC）[1]，为了解海淀区DEC 的型别分布特点和耐药性情况，为食源性疾病的防控和治疗提供参考，我们将2015～2019年海淀区开展食源性疾病监测的2 家哨点医院送检的1 810 份腹泻病人粪便标本进行了DEC 的分离培养、生化鉴定、多重实时荧光PCR 毒力基因测定和药敏检测，检测结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2015～2019年海淀区开展食源性疾病监测的2 家哨点医院送检的1 810 份腹泻病人粪便标本，病例定义为由食品或怀疑由食品引起的，以腹泻为主要症状的病例，每日腹泻≥3 次且粪便性状异常的就诊患者。

1.2 试剂和仪器

1.2.1 试剂：麦康凯、三糖铁、营养琼脂购自北京陆桥技术有限责任公司，GN 细菌生化鉴定卡购自美国生物梅里埃公司，五种致泻大肠埃希氏菌核酸多重实时荧光PCR 检测试剂盒购自北京卓成惠生生物科技股份有限公司；革兰阴性需氧菌药敏检测板购自上海星佰生物技术有限公司，所有试剂均在有效期内使用。

1.2.2 仪器：VITEK 2 compact 全自动微生物生化鉴定系统由美国生物梅里埃公司生产，7500fast 实时荧光定量PCR 仪器由美国AB 公司生产。

1.3 试验方法

1.3.1 DEC 检测方法：将粪便直接划线接种在麦康凯培养基上培养,挑选5 个以上可疑菌落进行生化鉴定，然后用五种致泻大肠埃希氏菌核酸多重实时荧光PCR 检测试剂盒对菌株进行特征性基因检测。

1.3.2 药敏试验方法：对确认为DEC 的菌株用微量肉汤稀释法测定其药物敏感性，用商品化药敏板进行检测，肉眼对药敏板进行判读，得到最低抑菌浓度（minimum inbibitory concentration, MIC）值。对照美国临床实验室标准化委员会（CLSI）的相应标准获得相应敏感(S)、中度敏感(I)和耐药(R)的结果。选择大肠埃希氏菌ATCC 25922 作为药敏试验质控菌株。

1.4 统计学分析 采用SPSS 16.0 软件对数据进行统计分析，采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 1 810 份腹泻病人粪便标本DEC 检出情况 见表1。1 810 份粪便标本检出DEC 214 株，检出率为11.8%，各年度检出率差异有统计学意义（χ2=10.858，P=0.028）。检出DEC 共有四种型别，分别为EAEC 96 株（44.9%），ETEC 89 株（41.6%）EPEC 24 株（11.2%），EIEC 5 株（2.3%）。

表1 2015～2019年各种DEC 分布情况[株（%）]

2.2 药敏试验结果 见表2。药敏检测结果显示214 株菌除对亚胺培南无耐药外，对其余11 种抗生素均有不同程度的耐药。

表2 214 株DEC 对12 种药物敏感检测结果[株（%）]

2.3 214 株DEC 各年度耐药率 见表3。结果显示头孢西丁、头孢他啶和氯霉素呈现较低的耐药性，而氨苄西林、复方磺胺、头孢噻肟和四环素均呈现较严重的耐药性。

表3 214 株DEC 各年度耐药率[n（%）]

2.4 多重耐药性结果 214株DEC中，70株（32.7%）全部敏感，有144 株（67.3%）耐药。在耐药株中，28 株（19.4%）单耐药，17 株（11.8%）双耐药，3种到9 种抗生素多重耐药株有99 株（68.8%）。有63 种耐药谱，单耐药谱AMP 有15 株（10.4%），然后依次是AMP-CXT-CFZ 耐药谱11 株（7.6%）、TET-SXT 耐 药 谱8 株（5.6%），TE，AMP-TETSXT，AMP-AMS-TET-SXT，AMP-TET-GEN-SXT这4 种耐药谱各5 株菌（3.5%），其它耐药谱的菌株数在1～4 株不等。AMP，TET，AMS 等抗生素在三种及三种以上的多重耐药谱中出现的次数最多。

3 讨论

本研究结果显示5年来北京市海淀区DEC 的总检出率同北京市怀柔区[2]2014～2018年检出率（11.6%）相近，与北京市丰台区[3]2017年（12.43%）、北京市顺义区[4]2013～2015年（8.55%）检出率相比略有差异。同其他省份地区相比高于淮安市[5]2014～2015年（7.10%）和沈阳地区[6]2012～2014年（6.65%）的检出率，低于济南市[7]2014～2018年（28.55%）和贵阳市[8]2010年（34.65%）的检出率。海淀区检出的DEC 以EAEC 和ETEC 为优势型别，其次是EPEC，与济南市[7]检出的各型别DEC 排序完全一致，优势型别方面与淮安市[5]、沈阳地区[6]、贵阳市[8]一致，与北京市其它区[2-4]和上海市宝山区[9]存在差异。说明不同地区DEC 检出率以及优势型别分布各不相同，出现这种情况的原因可能与各地区所处的环境条件、卫生状况、居民卫生安全意识有关，农村和城乡结合部地区的检出率可能就会高于城市，同时各个实验室的检测能力和检测手段也可能导致检测结果出现差异。另外有资料[10]显示DEC 可疑暴露食物种类阳性检出率最高的饮料冷冻饮品、肉类制品和水果类制品与DEC 常污染的食物相一致。

药敏结果显示，检出的DEC 除有2 株中介外，其余212 株均对亚胺培南（IMP）敏感，与北京市丰台区[3]报道的全部敏感基本一致，说明IMP 对治疗本地区DEC 感染非常有效。头孢他啶、氯霉素和头孢西丁的药敏结果提示在临床治疗时可以在这几种抗生素做适当的选择。在耐药性方面，不同菌株的耐药情况差别很大，种类繁多的耐药谱为临床医生的治疗选择带来压力。在各种多重耐药谱中AMP-CXT-CFZ 耐药谱所占的比例最大。所有耐药株中对氨苄西林耐药性最高，其次是四环素和复方磺胺，对3 种及以上抗生素产生多重耐药的菌株达68.8%，最严重的耐药株对9 种抗生素产生多重耐药。检测数据提示海淀区DEC 耐药情况不容乐观,而且多重耐药谱广，给临床合理选择抗生素以及合理联合用药带来了挑战。

本研究通过对DEC 毒力基因测定来确定各种DEC 型别的分布以及对菌株的耐药性检测，为DEC 的流行、溯源和临床治疗参考提供了可靠的数据，同时也提示要加强对抗生素的合理使用及管理，延缓耐药株的产生和传播。