查晴 肖凡 张倩茹 叶佳雯 张煜 杨玲 杨克 刘艳

钙化性瓣膜疾病是导致主动脉瓣膜功能失调的常见原因，其主要临床表现有运动后呼吸困难、心律失常、昏厥、心绞痛等[1-5]。在钙化性瓣膜疾病进展过程中，间质细胞作为主动脉瓣膜中主要细胞，参与胞外基质合成和钙化[6]。研究表明，主动脉瓣膜间质细胞过表达Sox9可减缓钙化进程，而Notch通路对Sox9激活起调控作用。当敲除Notch1与Sox9相结合的结构域后，Notch胞内结构域(NICD)对Sox9转录活性的调控作用大幅削减。因此，抑制Notch信号通路可下调Sox9表达，促使主动脉瓣膜间质细胞钙化[7-9]。本课题组前期研究发现，Sox9作为转录激活因子，通过直接或间接作用与其他信号通路协同参与软骨分化形成过程。

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是胰高血糖素降解产物[10]。GLP-1通过结合其特异性GLP-1受体(GLP-1R)抑制胰高血糖素分泌，刺激胰岛素和促生长素抑制素分泌，从而缓解胰岛素抵抗[11-12]。而GLP-1R激动剂如艾塞那肽、利拉鲁肽、利西拉来等除具有降糖作用，还可减轻体质量，降低血压，改善血脂，减少心血管事件，提高生存率[13-16]。GLP-1R活化还可通过激活多种激酶降低心肌缺血性损伤，抑制局部缺血后重构。本研究探讨在主动脉瓣膜钙化过程中，GLP-1及其受体对于Notch1-Sox9信号通路的调控作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

DMEM∶F12培养基 ( 1∶1，低糖含20%胎牛血清)、低糖培养基 (含10%胎牛血清)、成骨诱导分化培养基均购自GIBCO公司。免疫组织化学染色试剂盒、BCA试剂盒均购自迈新公司；Sox9、GLP-1R、NICD和β-actin一抗均购自Abcam公司，免疫荧光检测二抗购自CST公司；……