廖荣恒 祁禛 汪永义

心脏纤维化是一种以肌成纤维细胞过度分泌与细胞外基质过度沉积为特点的病理过程，急性心肌梗死(AMI)后，心脏成纤维细胞在以转化生长因子-β1(TGF-β1)为主的细胞因子作用下分化为肌成纤维细胞，并分泌大量细胞外基质(ECM)，使心脏顺应性下降，影响心脏正常功能[1-2]。心脏成纤维细胞分泌的细胞外基质是维持正常心脏结构必不可少的成分，但分化的肌成纤维细胞分泌细胞外基质的能力大大提升，从而导致心脏纤维化[3-4]。细胞外基质的特异性构成组分是α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)[5]，常作为评价细胞外基质生成的标准。其次，心脏成纤维细胞分化的特征还包括细胞增殖和迁移能力增强[6]。

RhoA/ROCK通路由Rho家族小G蛋白最具代表性的亚型RhoA及其下游分子Rho相关激酶(ROCK)构成，广泛参与如转录调节、迁移、黏附、增殖、细胞生存与凋亡等细胞基本功能的调控[7]。ROCK家族包括2种亚型，即ROCK1与ROCK2，两者具有高度同源性[8]。作为调节细胞行为的重要信号通路，RhoA和ROCK1广泛参与血管平滑肌增生、心肌肥厚和心肌纤维化等过程[9-11]。本研究拟探究RhoA/ROCK2通路在AMI后心脏成纤维细胞分化过程中的作用机制。

1 材料和方法

1.1 细胞培养和转染

人心脏成纤维细胞在含5%胎牛血清的DMEM/F-12培养基中，于37 ℃、5%CO2的培养箱中培养。实验处理前，成纤维细胞在无血清DMEM/F12中饥饿6 h,然后用含10 ng/L TGF-β1带血清DMEM/F-12培养基培养。RhoA 小干扰RNA通过Lipo3000在无血清DMEM/F-12培养基中转染8 h，之后换成用含10 ng/L TGF-β1带血清DMEM/F-12培养基继续培养。

1.2 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)

收集细胞后于常温下用……