罗布占堆 潘永越

西藏大学医学院实验中心，西藏拉萨市 850000

机能学实验是一门重要的医学基础实验课，主要内容包括生理学、药理学、病理学三门课程的内容。当前机能学实验面临的问题是效果不理想，实验成功率不高。总结失败的原因，主要有：实验流程中，观察项目多、时间较长、操作步骤较复杂、家兔少尿甚至无尿等情况。为了更好地提高实验的成功率，笔者在以往大量的实验中归纳出一定的经验，以供参考。

1 实验前和实验中的准备

动物实验的效果受到多方面因素的影响，如动物因素、环境因素等，以下将从这两个方面来探讨在实验过程中如何更好提高实验的成功率。

1.1 实验动物的合理选择 从具有正规饲养资格的厂家采购健康成年(体重为2.5～3kg)，品种为新西兰大耳的白兔。在正式实验前，保证动物的身体健康情况，如给予动物高水分的食物，让动物可以自由饮水[1]。

1.2 实验温湿度的控制 首先，在正式开设实验前，先确定实验的季节和时间。建议在两个时间段选择，每年的4月份和10月份中室温恒温在20℃左右的时间。开始实验前，保持实验室整洁干净和通风性，湿度控制在45%～70%。其次，试验中，先用恒温浴槽保温滴注的生理盐水，并时刻注意观察动物体温，减小实验中动物创口，防止因家兔的抵抗力减弱而造成家兔尿液生成的减少。最后，手术结束后，在创口处用温热的湿纱布覆盖，从而达到减少体液蒸发的作用[2]。

2 药物注射问题

多种药物的多次静脉注射也是影响家兔尿生成的重要因素之一。从过往教学经验看，虽然参加实验的学生在实验前已进行过家兔耳缘静注射的操作，但操作熟练度还需要改善。由于熟练度不高，大多数学生在完成一两种药品的多次注射后，动物的两只静脉已被破坏或者两耳水肿，无法进行后续的实验。为了改善这一情况，可以采取如下措施：

2.1 改变输液给药方式，合理改造输液装置 在过往实验中，传统的耳缘静脉麻醉可能是操作失败的一个原因。在实验中，由于需要用多种药物多次地对实验中的家兔从耳缘静脉给药，家兔的耳朵很容易在实验中水肿或者静脉受到破坏，实验很容易就此失败。为此，在参照其他院校采用静脉输液给药方法基础上，笔者在多次的实验中，找到一种可以解决输液和给药冲突的输液方式——耳缘静脉输液给药。这种方式的输液主要采用生理盐水进行，大部分院校解决输液和给药冲突的方法主要有两种：(1)在连接输液针的地方连接一个三通管；(2)直接通过拔插输液针，首先将输液针和注射器相连，其次在给药的间隙将输液针和输液装置相连。但这两种方式的弊端在于，空气很容易进入其中，引发气体栓塞。针对这种情况，在大量实验基础上，笔者对输液装置进行了改进：用一小段橡皮软胶管在输液管和输液针头之间连接，以便用注射器直接扎胶管，防止实验过程中气体进入[3]。有研究者提出，该过程中也许有从胶管的针眼往外漏液的情况，但由于静脉压力不是很高，故将这一个设想排除。整体而言，这种方式可以极大提高实验的成功率。

2.2 麻醉时选择一次性输液器针头 在一次性输液器针头的选择上，笔者取用输液器前面的细交管及针头，将原来实验采用的6～6.5号针头换成较细的5～6号输液器的针头，这样做的原因在于，初学者用较细的针头穿刺略粗的静脉血管，成功率相对较高(学生穿刺的成功率高达98%)。

2.3 保留静脉输液器针头 为了达到较好的实验效果，减少失败的次数和节约时间，在给家兔做实验时，仿照人输液时固定针头的方法，在第一次注射麻醉药品后，固定好兔耳缘静脉处的针头。同时，为了防止空气进入，用脱脂棉及白胶布堵好输液器前端与针管连接的接口每次换药时，将抽好的药管直接插入针头，这个过程一直持续到所需注射的药品注射完毕。

3 选择合适的手术方式

选择最适宜的手术操作有助于锻炼学生在复杂耗时的实验(如静脉麻醉、动脉插管、膀胱插管等)的动手能力。

3.1 采用股动脉穿刺的方法测量血压 颈总动脉插管是现在尿生成实验中常用的一种测量血压方法。动脉插管对于实验来讲非常重要，但操作过程相对较难，任何操作失误都有可能会导致动物大出血或循环血量降低，并最终导致尿量生成的减少。因而，为了更好地提高实验的成功率，可以考虑采用一种创伤小，操作快，对动物的生理功能影响小，可多次操作且实验结果稳定性高的方法——股动脉穿刺。具体的步骤为：首先，在一侧腹股沟区处剪毛备皮，随后准确找到相应的股动脉位置，在准备穿刺前，将头皮针接肝素帽端，将动脉留置针内的空气排尽；其次，将动脉留置针针体(约 1/2的位置) 插进股动脉管内，当看见回血后立即拔出针芯。此时需绷紧皮肤，将剩余针体推入血管内，直至针体 3/4的位置，最后接上压力换能器(充满肝素)测量动脉血压。

3.2 选择膀胱插管进行尿液的收集 当前收集尿液的方法主要与三种：输尿管插管、尿道插管和膀胱插管。其中，因为输尿管插管的弊端(常导致创伤性无尿)，这种方法已经被绝大部分实验室弃用。虽然后期有人提出第二种创伤小且效果较好的微创尿道插管，但这一方法很大程度上取决于实验者的熟练程度，且实际试验成功率不高。如果让手法不熟练的学生练习，很容易因为反复尝试性的试验导致尿道水肿，并最终影响尿液的排放。此外，如果实验者导尿管穿透尿道的插入方向不对，很难再次找准方向而进入膀胱。除了实验者的熟练度和检验的影响外，动物的次雄性也会影响尿道插管成功率。如果采用尿道比较特殊的雌性家兔，则试验更不容易成功。为了解决当前的难题，本实验室在多次的实验和教学中总结出第三种方法，即膀胱插管实验，不受操作者熟练度的影响，成功率相对更高。另外，这种手术带来的创伤在家兔的承受范围之内，创伤性无尿的发生情况较少。

3.3 选择尿道口结扎 在以往的实验指导教材中提出，为了防止尿液从尿道口流出，在进行膀胱插管前，需要将膀胱颈部结扎。笔者认为，这一措施是不必要的。一般而言，只有当膀胱内尿量达一定充盈度时(400～500ml)，尿液才会从尿道流出。当壁上的牵张感受器收到兴奋刺激时，动物的逼尿肌才会收缩，此时内括约肌开始松弛，并最终促使尿液经尿道排出。但采用膀胱插管时，家兔在膀胱排空后，膀胱插管会将产生的尿液即时引流出体外，也就不会出现教材上提到的膀胱储尿充盈，因而也就不会出现尿液从尿道口流出的情况。这个在笔者的教学过程中也得到验证，笔者发现，手术完进行记滴的过程中，很少会出现尿液从尿道口流出的情况。因此为了减少操作时间和学生在分离膀胱颈时损伤输尿管和膀胱可能造成的实验失误，笔者建议在采用膀胱插管法时不结扎膀胱颈部。

4 实验项目(尿生成的各个影响因素)顺序的调整

在尿生成实验中给药的顺序要在“促使尿生成增多与减少的药物交替给予”这一基本原则下进行。建议实验注射顺序为：首先是生理盐水，其次是去甲肾上腺素，再次是20%葡萄糖，从次是垂体后叶素，最后是速尿。将生理盐水这一步骤放在开始的原因在于，笔者采用的是静脉输液的方式给药，为了调快输液的速度，笔者采用生理盐水来观察对尿生成的影响。当家兔的尿液增加后，要把输液的速度控制在2滴 /9～10s，从而减少生理盐水对尿生成的影响[4]。在实验中，若因意外因素导致长时间无尿的情况，可以再次调快输液速度直至出现尿液。随后再进行后面的实验步骤，此时下一个实验项目注射的药物必须是能够使尿液减少的药物。

总之，为了提高实验成功率和达到较好的教学目的，笔者对实验进行探索性的改进和创新，可以使得经验较少和熟练度较低的学生更好上手，在实验程序上进行简化，避免手术过程中可能出现的各种因家兔无尿或者手术失败而无法继续实验的现象(如大失血、损伤性闭尿以及体液丢失)，从而提高实验的成功率。