王 妙 任云青 （山西医科大学汾阳学院，汾阳032200）

妇科癌症近年来日益引起人们的关注，成为一个重要的全球卫生保健问题［1］。据统计，宫颈癌在全世界女性癌症中的发病率和死亡率均排第四位［2］，且发病率呈现出逐年升高的态势，发病群体也呈现出年轻化的趋势。因此，深入研究宫颈癌发生及发展过程中的分子调控机制，对于指导临床治疗宫颈癌极为重要。

1977 年，SHIU 等［3］发现在无葡萄糖培养基中培养鸡胚成纤维细胞的过程中可诱导产生分子量为78 kD的蛋白，即命名为葡萄糖调节蛋白78（glucoseregulated protein 78 kD，GRP78），是热休克蛋白70（Hsp70）家族的成员［4］。有研究证明，GRP78在包括宫颈癌在内的多种恶性肿瘤中处于高表达［5］，参与肿瘤的增殖、侵袭和迁移，且其表达水平与肿瘤预后呈负相关。但关于GRP78 与宫颈癌之间的作用关系研究相对较少。因此，本文通过研究GRP78 对宫颈癌SiHa 细胞生物学行为的影响，初步探讨GRP78 在宫颈癌致病过程中的作用机制，为宫颈癌治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 材料 宫颈癌SiHa 细胞由山西医科大学第二医院馈赠，本实验室保存；NC-siRNA及GRP78-siRNA干扰基因购自上海吉玛；Lipo8000TM及逆转录试剂盒购自上海碧云天；Transwell 小室（孔径8 μm）及Matrigel 基质胶购自美国 Corning；GRP78 抗体购自ABclonal；E-cadherin抗体、N-cadherin抗体、Vimentin抗体、AKT 抗体、P-AKTser473抗体、GSK3β 抗体及P-GSK3βser9抗体购自 Proteintech；Cyclin D1 抗体及CDK4抗体购自CST；荧光定量PCR试剂盒购自德国Qiagen；Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒购自北京索莱宝。

1.2 方法

1.2.1 GRP78-siRNA 的转染 将生长状态良好的SiHa 细胞制备成3×105个/ml的细胞悬液，实验分为空白组、NC-siRNA 组、GRP78-siRNA659 组、GRP78-siRNA2082组、GRP78-siRNA1501组，37℃ 培养细胞至汇合度达60%~80%时进行转染。按照实验所需加入适量 siRNA 和 lipo8000TM，室温孵育 20 min 后转染。……