张海波 焦 洁 李平平 宋志明 （河南大学第一附属医院，开封 475001）

冠状动脉硬化性心脏病（冠心病）是威胁人类健康的主要疾病。尤其随着人口老龄化及城镇化进程的加速，心血管病危险因素明显增多，导致冠心病的发病人数持续增加。据最新发布的《中国心血管健康与疾病报告2019》显示，推算心血管病现患人数约3.3 亿，其中冠心病患者1 100 万，给患者家庭、社会以及国家社保带来了巨大的经济负担［1］。内皮功能障碍为心血管疾病的始动环节，早于动脉粥样硬化形态学改变［2］。因此，寻找到针对内皮细胞损伤的干预措施将成为治疗动脉粥样硬化相关性疾病的关键点。

既往研究证实一氧化氮（NO）系统参与了内皮细胞损伤的发病，而本课题组前期研究发现硫化氢（H2S）对高糖诱导的内皮细胞损伤具有保护作用［3］。本研究旨在观察外源性H2S对H2O2诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其对NO系统的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 H2O2、MTT 和 NaHS（161527）购自 Sigma-Aldrich；Ⅰ型胶原酶购自Invitrogen；无血清培养基（SFM）、M199 培养基和胎牛血清（FBS）购自Gibco；内皮细胞生长因子（ECGS）购自 BD 公司；抗eNOS 抗体（9586）购自Cell Signaling Technology；抗GAPDH 抗体（10494-1-AP）购自Proteintech；小鼠Ⅱ抗（BM3895）及兔Ⅱ抗（BM3894）购自武汉博士德；细胞裂解液和蛋白定量试剂盒（BCA）购自南京凯基；预染蛋白 marker 购自 Fermentas；NO 测试试剂盒购自南京建成。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 本研究采用原代人脐静脉内皮细 胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），其分离培养依据既往报道进行［3］。研究所用细胞为1~3代。本研究经河南大学第一附属医院伦理委员会讨论并批准，符合Helsinki原则。

1.2.2 流式细胞检测 收取第1代内皮细胞，交由河南大学第一附属医院实验室检测细胞表面标志物CD31。……