汪芹芹，徐 燕，胡韶光，刘珂珂， 桂双英

牙周炎是导致牙周组织缺损的重要因素之一，随着再生医学和牙周组织工程的发展，以自体来源的种子细胞复合生物材料植入牙周病损部位，修复牙周缺损受到越来越多学者的关注。但是，如何获取大量种子细胞仍是一个难题。芹菜素(4′,5,7,-三羟基黄酮)是一种黄酮类化合物，无毒且无致突变性,还有抗炎、抗氧化、抗病毒活性及抗肿瘤等药理作用。许周媚 等证实了芹菜素可显著促进 MC3T3-E1细胞成骨分化和矿化。人牙髓间充质细胞(human dental pulp mesenchymal stromal cells，hDPSCs)来源丰富、取材方便、免疫排斥小。该研究通过观察黄酮类化合物芹菜素对hDPSCs增殖及骨向分化的影响，探讨芹菜素用于辅助治疗牙周病等骨缺损疾病的可能性。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

芹菜素(美国MCE公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(美国Gibco公司)；DMEM培养基(美国Hylcone公司)；Countstar细胞计数仪(上海睿钰生物科技有限公司)；细胞培养箱、JJT-900超净台(美国Thermo公司)；荧光倒置显微镜(DMI3000B，德国Leica公司);Elx808U酶标仪、BCIP/NBT碱性磷酸酯酶试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；茜素红染液(美国Sigma公司)；Bio-oss骨粉(瑞士Geistlich公司)；扫描电镜(Hitachi S-4800，日本日立公司)。

1.2 实验药物

将适量芹菜素粉末溶于100 μl DMSO中获得10 mmol/L芹菜素溶液，0.22 μm过滤除菌,-20 ℃保存。使用时用培养基稀释成实验所需浓度。

1.3 实验动物

普通级新西兰兔10只，雌雄不限，2.25～2.75 kg，日龄90～120 d。由安徽医科大学动物中心提供并饲养。经安徽医科大学实验动物伦理委员会批准(编号：LLSC20190122)。

1.4 hDPSCs分离培养与传代

从安徽省口腔医院口腔颌面外科收集健康的离体第3磨牙，患者年龄18～35(23.4±5.10)周岁。……