新型鸭呼肠孤病毒弱毒株在雏番鸭体内的分布和排毒规律

2021-11-05华炯钢叶伟成刘可姝云涛倪征陈柳朱寅初张存

浙江农业科学 2021年11期

关键词：检测

华炯钢，叶伟成，刘可姝，云涛，倪征，陈柳，朱寅初，张存

(浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，浙江杭州 310021)

自2000年以来，在福建、浙江、广东和江苏等地鸭鹅群暴发一种以肝、脾出现大量出血性坏死灶为主要特征的新疫病，根据临床病理特征被命名为出血性坏死性肝炎(Hemorrhagic-Necrotic Hepatitis)，发病以5～10 d龄为主，死亡率达2%～15%，且患病鸭日龄越小，感染率和病死率越高[1-3]。多品种鸭(如番鸭、麻鸭、北京鸭、樱桃谷等)和鹅均可发生[4-7]。经分离鉴定、全基因组破译和分子进化树分析，确定该病原为一种新型鸭呼肠孤病毒(Novel Duck Reovirus，NDRV)[1-7]，与经典MDRV(Classical Muscovy Duck reovirus，CDRV)均属于禽正呼肠孤病毒群(AvianOrthoreovirusspecies group II)成员，但二者属于不同的基因型：CDRV为I型；NDRV为II型[8-11]。尽管传统DRV 和NDRV都属于禽正呼肠孤病毒群成员，病毒生物学特性有很多相似性，但是两者在致病性、抗原性及基因组结构上存在差异[2-3,9-12]。

本实验选取经DF-1细胞传代致弱的一株NDRV(JDm10株)人工感染雏番鸭，应用qRT-PCR技术[13]研究NDRV弱毒株在雏番鸭体内的分布动态及排毒规律，为探讨该病发病机理和研制NDRV活疫苗提供试验依据，更为今后对该病的防控奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验动物与病毒株

112只1 d龄雏番鸭购自金华兰溪禾旺克里莫种番鸭公司，出壳后未接种任何疫苗。NDRV JDm10弱毒株由本实验室经DF-1细胞连续传代150代获得(JD-150代)。

1.2 主要试剂与仪器

Prefilled Viral Total RNA Kit-Flex(货号KFRPF-805296)购自Thermo Fisher Scientific公司；One Step PrimeScriptTMRT-PCR Kit(Perfect Real Time)(货号RR064A)购自宝生物工程(大连)有限公司；Tissuelyser-24全自动样品快速研磨仪(上海净信科技公司)；Thermo Scientific King Fisher Flex全自动磁珠提取纯化系统(Thermo Fisher公司)；荧光定量PCR(ABI 7500)仪(Applied Biosystems公司)。