刘 辉，卢 扬，李 俊，范士杰，王立新，王 辉,*

（1.贵州省农业科学院生物技术研究所，贵州 贵阳 550006；2.贵州省农业生物技术重点实验室，贵州 贵阳 550006；3.贵州省毕节市农业技术推广站，贵州 毕节 551700）

多酚氧化酶（Polyphenol oxidase，PPO）含有铜离子，广泛分布于动物、植物、真菌和细菌中[1]。在有氧条件下，PPO先将单羟基酚氧化成邻二酚，再将邻二酚氧化成邻醌，最后聚合成褐色素[2]。一般认为，PPO在植物细胞内存在游离态（Soluble PPO，sPPO）和膜结合态（Membrane-bound PPO，mPPO）两种形式，且这两类同工酶间的性质差异较大[3-5]。当细胞膜结构受到破坏，mPPO便游离出来，从而使PPO酶活力显著提高，引起果蔬褐变，造成变色、变味、软化及营养下降等不良后果，导致果蔬的市场价值降低[6-7]。

由于mPPO的存在，使PPO的酶活力问题研究起来十分复杂。目前，国内外已经开始对膜结合态PPO进行研究，并且取得了较好的研究结果。如Zaini等[8]通过非离子型去污剂Triton X-114、热诱导相分配技术、硫酸铵沉淀法及琼脂糖凝胶层析等技术，成功地从蛇皮果中分离纯化出膜结合态多酚氧化酶，并对它的酶学特性进行了研究；Liu等[3]通过硫酸铵沉淀法及DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换法对苹果膜结合态PPO进行了纯化，并研究了其三维结构，同时与苹果的游离态PPO的性质进行了比较，发现它们在一定pH值及温度范围内的酶活力有差异，膜结合态PPO酶活力要显著高于游离态，且反应的最适底物也不一致。在马铃薯PPO的研究中，为降低马铃薯块茎发生的酶促褐变，探究其PPO的性质，对马铃薯PPO进行分离和性质研究受到广泛关注。目前，对游离态PPO的分离纯化及性质研究较多，如孟雅等[9]采用硫酸铵分级沉淀法、凝胶层析法及分级沉淀和层析相结合的方法对马铃薯PPO进行了纯化，并研究了其在不同工艺条件下的酶活力变化。……