徐汪洋，王业杨，张辉，黄丽珊

广东省第二人民医院骨科中心，广州 515000

脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是一种破坏性的创伤[1]，可导致神经功能缺损[2]、瘫痪，甚至死亡[3]。星形胶质细胞是中枢神经系统中一类重要的胶质细胞，对保护中枢神经系统中的神经元非常重要[4-5]，成为近年来SCI修复的研究热点[6]。Tribbles同源蛋白3(Tribbles homologue 3，TRB3)是一种细胞转录调控因子，参与调控细胞增殖、分化和凋亡，与机体炎症反应、氧化应激和肿瘤代谢等多种过程密切相关[7]。研究发现，TRB3表达下调对全脑缺血再灌注损伤所致大鼠神经元凋亡具有保护作用[8-9]，但目前其对SCI的作用研究较少。本研究旨在探讨TRB3对氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R)诱导的大鼠脊髓星形胶质细胞损伤的影响，以为治疗SCI引起的星形胶质细胞损伤及多种炎症反应提供靶点。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 D M E M/F 1 2 培养基、胎牛血清(美国Gibco公司)；TRB3 shRNA慢病毒(上海GenePharma公司)；CCK-8试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司)；乳酸脱氢酶(l a c t i c dehydrogenase，LDH)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)试剂盒(南京建成生物工程研究所)；肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1，IL-1β) ELISA试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；Annexin V-FITC/PI试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司)；Trizol试剂、Revert Aid第一链cDNA synthesis反转录试剂盒(日本TaKaRa公司)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术研究所)；ECL化学发光试剂、PVDF膜(美国Millipore公司)；细胞核蛋白提取试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；抗TRB3抗体、抗核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)抗体、抗β-actin兔克隆抗体、抗GFAP抗体(英国Abcam公司)；HRP标记的山羊抗兔IgG、FITC标记的羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)；白桦脂酸(betulinic acid，BA) (美国MedChemExpress公司)。……