朱秋媚，王宇，刘涵，富瑞丽，刘莹，刘景会，顾建阳

长春生物制品研究所有限责任公司，吉林长春130062

二硫键（S-S 键）是通过蛋白质中两个半胱氨酸上的巯基（-SH）氧化而形成的，在稳定蛋白质构象和保持其活性方面起着重要作用［1］。重组人生长激素（recombinant human growth hormone，rhGH）-Fc 是由两个相对分子质量为22 125 的GH 与相对分子质量为50 280 的重链通过Linker 连接而成，重链之间通过两对链间二硫键形成同源二聚体［2］。抗体药物中二硫键的排布是对其结构特征的一种反映［3］，因此，二硫键连接的确认成为rhGH-Fc 结构确认过程中非常重要的一环。

液相色谱质谱（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）作为一种分析工具，在蛋白质药物研发前期的结构表征、工艺优化、关键质量属性分析以及质量控制中有普遍应用［4］，LC-MS 能够精确测定多肽及蛋白质的相对分子质量，且通过二级碎片信息可解析肽段的氨基酸序列［5］，特别是蛋白质药物的二硫键确认和翻译后修饰分析，质谱的作用不可或缺［6］。基于质谱技术的分析方法能应用于蛋白质药物生产的各个阶段，提供蛋白质药物的一级序列信息（包括翻译后修饰）、高级结构分析以及构象研究等［7-8］。因此，本研究采用LC-MS 建立特异的方法，对rhGH-Fc 的二硫键进行解析。

1 材料与方法

1.1 样品 rhGH-Fc 为本公司制备。

1.2 主要试剂及仪器 盐酸胍购自美国Gibco 公司；碘乙酰胺（iodoacetamide，IAM）购自美国 Sigma公司；胰酶购自美国Promega 公司；乙腈（LC-MS 级）购自美国Honeywell 公司；甲酸（LC-MS 级）购自美国Fisher 公司；碳酸氢铵（分析纯）购自国药集团化学试剂有限公司；超滤管购自美国Millipore 公司；AcQuity 液相色谱系统、色谱柱CSHC1（82.1 mm ×100 mm，130 Å，1.7 μm）、G2-XS 精确质量四级杆飞行时间（Q-TOF）液质联用系统和UNIFI 软件购自美国Waters 公司。……