牛步青，胡术然，高有，张海浩，陈蕾西，常亚军，易力，姚宇峰，任芳芳

中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所，云南昆明650503

牛多瘤病毒（bovine polyomavirus，BPyV）是一种无包膜的闭环双链DNA 病毒，属于多瘤病毒科（Polyomaviridae）［1-2］。BPyV 基因组大小约为 4 700 bp，GC 占比为41.41%，包含6 种蛋白质编译基因，其病毒颗粒大小为 40 ～ 45 nm［2-3］。BPyV 最早在 1974 年从被污染的猕猴肾细胞（macaque kidney cell）培养物中分离得到，并可在 MRC-5、MDBK、FRhK-4、Vero和 MA104 细胞中复制增殖［1，4］。

BPyV 为顽固污染物，存在于牛血清、牛肉产品，甚至污水和垃圾中［3］。全球70%批次的牛血清均暴露在被BPyV 污染的风险下［4］。商业用途的牛血清中常发现BPyV 的DNA，而且其基因也可导致感染［2］。感染BPyV 后可能会导致恶性肿瘤，现已证明，在细胞实验中BPyV 基因组DNA 前段和呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）启动子组成的重组病毒能在啮齿类动物细胞中致瘤［4］。多瘤病毒目前仅在免疫抑制人群中产生病理学症状，但BPyV 的潜在致病性不容忽视［2］。

虽然新的疫苗生产工艺正转向无血清培养基，但仍有很多疫苗使用血清生产［2］。使用被BPyV 污染的牛血清生产人用生物制品会产生极大的风险，而且多瘤病毒较强的灭活抗性加剧了此担忧［2，4］。《美国药典》已建议使用合适的方法检测用于生产人用生物制品的牛血清中的BPyV［5］。因此，建立一种快速便捷的方法检测牛血清中可能存在的BPyV污染对人用疫苗的安全性保障具有重要意义。

本研究设计了2 对BPyV 的特异性引物及1 个BPyV 阳性重组质粒，建立了BPyV PCR 检测方法，并对方法进行优化、验证及初步应用。

1 材料与方法

1.1 细胞及病毒 Vero 细胞……