张朔，赵建，邹墅，张颖，赵东山，刘晓杰，刘玥，翟东颖，孙宏亮

1.长春生物制品研究所有限责任公司，吉林长春130012；2.吉林省药品检验所，吉林长春130033

森林脑炎是由森林脑炎病毒引起的一种以侵袭中枢神经系统为主的急性病毒性传染病［1］，该病目前尚无特异的治疗方法，病死率3% ～30%［2-3］。接种疫苗是控制该病流行的最经济有效的措施［4］。传统的转瓶培养工艺制备森林脑炎灭活疫苗存在难以克服的缺陷，主要包括地鼠用量相对较大，不符合关于实验动物使用的减少、替代及循环使用原则（即3R 原则）；转瓶使用数量多，具有人工劳动强度大，自动化程度低，效率相对较低，占用空间大，可控制性差，污染风险较高等缺点［5］。而细胞工厂用于大规模的细胞培养，可大量减少地鼠用量，具有空间培养面积大因而占地较小等优点，可达到在有限空间内提高产能、减少人工操作工作量、降低污染风险的目的，同时细胞工厂表面经过特殊处理，可确保细胞黏附和生长的最佳条件［6-7］。

本研究采用细胞工厂培养原代地鼠肾细胞收获病毒液，经超滤浓缩、灭活、纯化后制备了森林脑炎灭活疫苗，建立连续培养多次收获工艺，以提高疫苗产量。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF 级金黄地鼠，雌性，体重13 ~16 g，日龄12 ~ 14 d，由长春生物制品研究所有限责任公司动物室提供，动物合格证号：201600014430。

1.2 病毒 工作种子森林脑炎病毒森“张”株，第10代，由长春生物制品研究所有限责任公司疫苗三室保存并提供。

1.3 主要试剂及仪器 MEM 培养基（干粉）购自美国Hycolone 公司；……