郝中伟 刘祖秋 李红敏 胡岩松 罗学胜

血管平滑肌细胞（VSMC）是动脉血管的主要组成部分，病理条件下VSMC会由“收缩型”向“合成型”转化，表现为收缩相关蛋白表达下降，细胞外基质成分的分泌活跃，迁移、侵袭能力增强［1］。炎症因子可诱导VSMC发生表型转化［2］，进而参与动脉粥样硬化、血管支架置入术后再狭窄等疾病的发生发展［3-4］。肿瘤坏死因子α（TNF-α）在高血压、动脉粥样硬化患者外周血中显著升高，硬化斑块组织中也能检测到TNF-α的高水平富集［5-7］。基础研究发现，TNF-α可通过诱导VSMC表型转化参与动脉重塑［8］、泡沫细胞形成［9］、新生内膜增生［10］等病理过程。本研究旨在探索TNF-α诱导VSMC表型转化的关键信号分子，并通过细胞拯救实验验证靶向该分子能否阻断TNF-α对VSMC表型的影响。

1 材料与方法

1.1 转录组测序数据下载和基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis，GSEA）从基因表达数据库（gene expression omnibus，GEO）下 载GSE115311转录组测序表达矩阵，从中提取来自TNF-α处理的VSMC（GSM3175352、GSM3175353）和 正 常VSMC（GSM3175354、GSM3175354）的RNA-seq结果。利用GSEA软件（4.1.0版），选择MSigDB库中c2.cp.kegg.v7.2.symbols.gmt基因集进行富集分析。显著富集标准为校正后的富集分数（normalized enrichment score，NES）绝对值>1.0，错误发现率（false discovery rate，FDR）<25%，且P<0.01。

1.2 细胞培养 人主动脉平滑肌细胞购自Gibco公司，于添加平滑肌细胞生长添加剂的231培养基中培养传代，37 ℃、5% CO2环境条件。取第3～6代细胞进行实验。

1.3 细胞处理及分组 取对数生长期的VSMC，经2%胎牛血清预处理24 h后进行实验。在12孔板中加入10 ng/mL 的TNF-α（abcam公司），分别处理0 h、12 h、24 h和48 h，用于检测杆状病毒IAP重复序列3（baculoviral IAP repeat-containing 3，BIRC3）的mRNA和蛋白表达。在6孔板中，采用lipofectamine 2000试剂盒，分别将BIRC3特异性干扰RNA（siBIRC3）和阴性对照干扰RNA（siNC）转入细胞。转染24 h后，再用TNF-α（10 ng/mL）处理两组细胞，用于后续实验。