叶蕾 张婷婷 曹婕露 陈曦 姚侃男 姚嘉明 陈芝芸 严峻彬

胆汁淤积是一类由于肝细胞、胆管细胞分泌胆汁障碍或胆汁运行障碍导致的极具破坏性的肝脏疾病［1-2］，若未及时进行治疗，胆汁淤积进一步恶化会造成肝损伤，最终导致肝硬化或肝功能衰竭［3-4］。水通道蛋白8（AQP8）和水通道蛋白9（AQP9）均属水通道蛋白家族，广泛分布于肝细胞膜和胆管膜，在调控胆汁分泌中发挥重要作用［5-6］。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（PKB/AKT）分别是AQP8、AQP9的上游信号通路，PI3K和AKT的激活可以上调AQP8、AQP9的表达［7-8］。本研究以α-异硫氰酸萘酯（ANIT）诱导胆汁淤积性肝损伤大鼠模型，观察AQP8/9及其上游信号通路PI3K/AKT在大鼠肝脏的动态变化，为胆汁淤积性肝损伤的防治提供新的治疗靶点和思路。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD雄性大鼠48只，体质量（140±10）g，SPF级，由上海西普尔-必凯实验动物中心提供，动物许可证［SCXK（沪）2013-0016］，饲养于浙江中医药大学实验动物中心。

1.2 试剂与仪器 ANIT（Cat：249447）购自北京百灵威科技有限公司；总RNA提取试剂盒（Cat：9767）、逆转录试剂盒（Cat：RR036A）、荧光定量PCR试剂盒（Cat：RR820A）均购自宝生物工程（大连）有限公司；丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒（REF：14127070201）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒REF：14126070201）、碱性磷酸酶（ALP）试剂盒（REF：141041702201）、总胆红素（TBIL）试剂盒（REF：14108170201）、总胆汁酸（TBA）试剂盒（REF：13300102101）为德赛诊断系统（上海）有限公司产品；总蛋白提取试剂盒（Cat：KGP2100）购自江苏凯基生物技术股份有限公司；BCA法蛋白定量试剂盒（Cat：PQ0011）、β-actin鼠单抗（Cat：ab008-040）、过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗（Cat：GAM007）、过氧化物酶标记的羊抗兔二抗（Cat：GAR0072）、Potent ECL Kit（Cat：P1425）为杭州联科生物技术有限公司产品；AQP8鼠单抗（Cat：sc-81870）、AQP9鼠单抗（Cat：sc-74409）为美国Santa Cruz产品；……