叶兰 凌晨

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发病率占所有恶性肿瘤的9%～10%，恶性程度与肿瘤转移是造成患者死亡的主要原因。恶性肿瘤的转移进程中上皮-间质转化（EMT）发挥着关键的调节作用，癌细胞表型发生频繁的暂时性、异质性改变，表观遗传调控可部分解释癌细胞表型灵活转变的特性，其中microRNAs（miRNAs）的转录后调控机制起着重要作用［1-2］。miR-30a可通过靶向ZEB2［3］和SLUG［4］抑制乳腺癌细胞的恶性转化以及EMT进程。超声（US）成像技术是一种实时成像技术，造影剂微泡优先分布于肿瘤中丰富的微血管，从而进行肿瘤显影［5］。近年来，超声靶向微泡破坏（UTMD）作为药物和基因的递载系统，体现出巨大的潜力，引起众多研究者的重视。笔者拟利用UTMD技术在体外研究miR-30a递载进入乳腺癌细胞后对癌细胞EMT进程的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 人乳腺癌细胞株MDA-MB-231购于中科院上海细胞库，细胞贴壁培养于含15%胎牛血清的L-15培养液中，在37 ℃、5% CO2的细胞恒温培养箱中常规培养。

1.2 试剂与仪器 SonoVue购于博莱科公司，细胞凋亡检测试剂盒购于碧云天生物技术公司，双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司，Bcl-2抗体、Ki-67抗体、cl-caspase-3抗体、Vimentin抗体、N-cadherin抗体、Slug抗体、GAPDH抗体均购自美国Cell Signaling Technology公司，荧光素酶报告质粒载体由南京金斯瑞生物科技公司构建，流式细胞分析仪购自美国BD Bioscience公司，实时荧光定量PCR为瑞士Roche公司生产，Envision分析仪由美国PerkinElmer公司生产。

1.3 微泡制备和UTMD转染 SonoVue瓶内注射5 mL无菌生理盐水，振荡至全部分散。6孔板培养MCF-7细胞，按照次日达到70%接种密度进行传代培养，过夜培养后，用SonoVue进行转染，分为4组，每组3孔细胞。……