王立 谢鹏 贺小武 季世伟 周建平

中国是胃癌高发区［1］，>60%的胃癌患者在初诊时已处于进展期，预后较差［2］。为改善胃癌预后，现丞需寻找新的分子生物学标志物，Holliday交叉识别蛋白（HJURP）位于人染色体的2q37.1上，长约17.73kb，有9个外显子、2529个核苷酸，编码748个氨基酸［3］，是着丝粒蛋白A的分子伴侣（CENP-A），与CENP-A结合促进CENP-A在核小体上的招募，辅助核小体装配，若其功能不全，可能会导致肿瘤发生［4］。已有研究报道，HJURP在乳腺癌、肝癌中呈现高表达，且与不良预后相关［5-6］，但HJURP在胃腺癌中的高表达与预后并不相关［7］。本研究拟通过检测HJURP在胃癌及正常胃组织中的表达，分析其与临床病理及预后的相关性，探讨HJURP基因与胃癌之间可能存在的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料 选取2009年1月至2016年12月本院普外科收治的胃癌患者79例，胃癌根治术前均未接受放、化疗等治疗。其中，男58例，女21例；年龄36～83岁，中位年龄66岁；肿瘤直径≥5 cm者26例，肿瘤直径<5 cm者53例（若肿块为溃疡型，以溃疡最外侧缘为界确定肿瘤直径）；病理组织学类型，中高分化癌51例、低分化或未分化癌28例；胃壁浸润程度即胃壁侵犯深度，T1/T2 17例、T3/T4 62例；有淋巴结转移58例，无淋巴结转移21例；TNM分期参照2018年美国癌症联合委员会标准，Ⅰ/Ⅱ期30例、Ⅲ/Ⅳ期49例；术后病理证实脉管有癌栓者43例，无癌栓者36例；术前CEA≥5 ng/mL者63例，<5 ng/mL者16例；术后电话或门诊随访，死亡44例，中位生存期39个月。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法 收集79例胃癌患者的胃癌组织作为实验样本，另随机选取同期于本院就诊的胃良性疾病患者27例，收集其正常胃组织（非癌样本旁的正常胃组织）作为对照样本。采用免疫组化二步法检测正常胃部组织、胃癌组织中HJURP蛋白的表达。病理蜡块连续切片，厚度3～5 μm，3片；将切片放入60 ℃烤箱烘烤2 h；二甲苯浸泡2次，进行脱蜡，每次5 min；无水乙醇2次、95%乙醇1次、70%乙醇1次，进行水化，每次3 min；然后，纯水漂洗3 min，95 ℃预热，0.01 M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0）抗原修复20 min，加入3%过氧化氢甲醇溶液静置10 min进行阻断，加入5%BSA封闭液室温静置20 min封闭，滴加HJURP一抗（1∶200）4 ℃过夜，滴加辣根酶标记的兔二抗室温孵育30 min，DAB显色，苏木素复染后封片。实……