曾高淳 吴苗 曾令基 王雅文 罗琼 赖沛龙 杜欣 翁建宇

1华南理工大学医学院（广州510006）；2广东省人民医院（广东省医学科学院）血液内科（广州510080）

闭塞性细支气管炎（bronchiolitis obliterans，BO）是异基因造血干细胞移植后的严重晚期并发症，以小气道纤维化为主要病理机制，现有治疗方法效果不佳，患者5年病死率达50%，仍需探索新的治疗策略［1-3］。

肌成纤维细胞（myofibroblasts，MFB）是纤维化的核心效应细胞，MFB 凋亡逃逸是纤维化发生发展的重要机制，与BCL⁃2 家族失衡密切相关［4］，近年来研究［5］表明靶向BCL⁃2 失衡表达诱导MFB 凋亡，可逆转已形成的皮肤纤维化，因此靶向MFB 凋亡可能是改善BO 的新治疗策略。

青蒿琥酯（artesunate，ART）抑制多种器官纤维化［6］。王昌明等［7-11］证实：ART 可通过诱导人肺成纤维细胞（fibroblasts，FB）凋亡、抑制FB 分泌功能、抑制FB 向MFB 转化，发挥抗肺纤维化作用。FB 是MFB 众多来源之一，调控纤维化核心细胞——MFB 凋亡可能是遏制和逆转纤维化的更高效靶点。ART 通过调控BCL⁃2 家族平衡诱导FB 及多种肿瘤细胞凋亡［7，12-14］，笔者前期发现ART 可以减轻小鼠BO 病理损伤［15］，但其对MFB 的作用及机制鲜有报道。本研究就ART 能否直接诱导MFB 细胞凋亡及其可能的相关机制展开研究和探索，以期为ART 治疗BO 提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 细胞来源正常人胚肺成纤维细胞系MRC⁃5（ATCC 公司）。

1.1.2 主要试剂α⁃MEM 培养基、胰酶、胎牛血清（美国Gibco 公司），TGF⁃β1（美国PeproTech 公司），青蒿琥酯（美国Sigma 公司），细胞增殖及毒性检测（CCK⁃8）、AnnexinV⁃AF647/PI（上海奕杉生物公司），JC⁃1 线粒体膜电位荧光探针（上海翊圣生物公司），逆转录及RT⁃qPCR 试剂盒（湖南艾科瑞生物公司），兔抗人α⁃SMA、兔抗人GAPDH 和HRP 标记的羊抗兔IgG（英国Abcam 公司）。……