戴明男

摘 要：为确定微生物法测定米粉中维生素B6含量的不确定度，本文利用SHP-250型生化培养箱，依据GB 5009.154—2016第二法操作指导，进行了米粉中维生素B6的测定。并从样品称量、样品稀释定容、样品测量等方面，分析了微生物测定米粉中维生素B6含量不确定度来源。样品称量、样品稀释定容、样品测量均可以引入维生素B6含量测定不确定度，需要测定操作者从仪器、操作、环境等多个方面严格控制，减小含量测定偏差。

关键词：微生物法;米粉;维生素B6;含量;不确定度

维生素B6又可称之为吡哆素，包括吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺等多个成分，可溶于水，参与人体多种代谢反应。维生素B6是米粉中重要营养组成之一，但因含量处于较低的水平，测定难度较大。《食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定》（GB 5009.154—2016）规定了食品中维生素B6的含量测定方法，微生物法为标准第二法，适用于不同类别食品中维生素B6的测定。本文评估了利用GB 5009.154—2016第二法测定米粉中维生素B6含量的不确定度。

1 材料与方法

1.1 材料

SHP-250型生化培养箱、Thermo酶标检测仪、多管式旋涡混合器、水浴锅、0.2 μm无菌滤膜[1]。市售婴幼儿配方米粉、维生素B6标准品（≥99.0%），柠檬酸盐缓冲液（pH为4.5）、马铃薯酸性磷酸酶、无菌水。

1.2 实验方法

1.2.1 操作步骤

在250 mL锥形瓶内，放入2.5 g米粉样品，利用单标线吸量管加入0.05 L柠檬酸盐缓冲液后、0.025 L马铃薯酸性磷酸酶，在多管式旋涡混合器内混合均匀。进而放置在无光照直射的37.0 ℃室温环境中，孵育60 min，间隔手动振荡[2]。孵育完毕后，加入0.1 L灭菌水逐级稀释，在95.0 ℃水浴锅内振荡，在短时间内冷却至室内温度后过滤、无菌离心取上清液[3]。……