李 娜， 曲音波， 杨培龙， 余晓斌， 罗 玮*

（1.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡214122；2.山东大学 微生物技术国家重点实验室，山东 青岛266237；3.中国农业科学院饲料研究所 农业农村部饲料生物技术重点实验室，北京100081）

三孢布拉霉（Blakeslea trispora）是一种重要的丝状真菌，因其具有类胡萝卜素积累量高、工艺相对简单、成本较低和易于提取等优点，可用于工业大规模生产类胡萝卜素。目前，对于三孢布拉霉的研究主要集中在通过传统诱变选育手段获得类胡萝卜素高效合成菌株，但该技术工作量大、效率低，且获得的菌株容易出现退化[1]。采用系统代谢工程策略和合成生物学技术无疑是解决上述问题的最好替代方法，但是目前缺乏针对三孢布拉霉的高效遗传转化工具。

根癌农杆菌介导转化（Agrobacterium tumefaciensmediated transformation，ATMT）是依靠T-DNA在诱导条件下转移基因到宿主基因组中的能力，将外源基因导入宿主的转化技术[2]，已成功在卷枝毛霉[3]、里氏木霉[4]等丝状真菌得到应用。相比于其他遗传转化方法，ATMT具有转化效率高、侵染受体选择多样等优点[5]，已是丝状真菌遗传转化系统中常用的方法。黄琼瑶[6]首次证明农杆菌介导三孢布拉霉孢子遗传转化的可行性。但在研究中发现农杆菌介导的孢子转化法难以得到转化子，其原因可能是孢子细胞壁厚的缘故。

由ku80基因编码的ku80蛋白是组成ku蛋白的两个亚基之一，最早是在患有多肌炎硬皮病重叠综合征的日本姓ku的患者血清中发现[7]，因该亚基的相对分子质量大小为83 000，故命名为ku80[8]。……