袁涛，江航，陈正权，文坤明

遵义医科大学附属医院胃肠外科，贵州遵义 563003

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是常见的消化系统恶性肿瘤，其发病率在恶性肿瘤中居第3位，病死率居第2位[1]。手术切除和放化疗是CRC的主要治疗方式[2]，然而，即使实施了标准的根治手术及放化疗，CRC患者的5年总生存率(约65%)仍未见明显改善，肿瘤复发和转移是其治疗失败的主要原因[3]。研究发现，上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transitions，EMT)与多种恶性肿瘤(包括CRC)的复发、转移、耐药等恶性生物学行为密切相关，最终导致治疗失败[4]。本课题组前期研究发现，hnRNPAB在CRC组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织，且hnRNPAB高表达与CRC分期和患者预后不良密切相关[5]。hnRNPAB对结直肠癌细胞EMT过程的调控作用研究较少。本研究旨在探讨过表达hnRNPAB基因对人结直肠癌SW480、HT29细胞EMT的影响及其分子机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、L-15培养基(培养SW480细胞)、5A培养基(培养HT29细胞)购自美国HyClone公司；2.5%胰酶购自北京索莱宝科技有限公司；RNA提取试剂盒、PrimeScript RT reagent Kit反转录试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；Transwell小室购自美国Corning公司；细胞全蛋白提取试剂盒和BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；鼠抗人E-cadherin、N-cadherin、波形蛋白、WNT3A、WNT5A、β-catenin、GAPDH和β-tubulin一抗以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠IgG二抗购自美国Proteintech公司。过表达hnRNPAB的慢病毒(hnRNPAB-GFP-PURO)及阴性对照病毒(NC-GFPPURO)由上海汉恒生物科技有限公司构建。

1.2 方法

1.2.1 慢病毒转染实验 人结直肠癌SW480、HT29细胞购自上海中科院细胞库。分别用hnRNPAB-GFPPURO和NC-GFP-PURO转染SW480、HT29细胞，设置实验组(SW480-hnRNPAB、HT29-hnRNPAB)与对照组(SW480-NC、HT29-NC)。转染步骤：将细胞于含10% FBS的培养基中培养，待细胞融合度达到80%以上时进行病毒转染；……