庞丽然，贺丞，杜力，刘国芳

华北制药集团新药研究开发有限责任公司，河北石家庄050015

药用辅料是制剂的重要组成部分，其质量和安全性直接影响制剂的有效性和安全性［1］。吐温80是一种非离子型表面活性剂，可作为稳定剂、分散剂、乳化剂或增溶剂等，多种重组蛋白药物中均以吐温80作为稳定剂。国内外均有报道吐温80可导致严重的过敏反应，也可产生呼吸困难、恶心、呕吐、皮疹等不良反应［2-3］。因此，测定吐温80含量可为重组蛋白的临床安全用药提供参考，为其质量评价提供依据。

吐温80含量常用的检测方法有硫氰酸钴铵比色法、紫外光谱法、分子排阻-蒸发光散射法、气相色谱法等［4］，《中国药典》四部（2020版）收录吐温80含量的检测方法为硫氰酸钴铵比色法［5］，该方法的原理为吐温80中的聚乙氧基可与铵钻硫氰酸盐反应形成蓝色复合物，溶于二氯甲烷，通过比色测定吐温80含量。但该方法检测范围仅为0～100 μg／mL，单抗药物蛋白浓度高，干扰大，吐温含量高，因此本实验将药典方法中高二氯甲烷的用量调整为4.00 g，硫氰钴铵溶液浓度提高3倍，并对改进后的方法进行验证，以期适用于高浓度重组蛋白药物中吐温80含量检测。

1 材料与方法

1.1 样品 重组人源抗hTNF-α单克隆抗体半成品（批号为：SY20180301，简称半成品）及重组人源抗hTNF-α单克隆抗体注射液（批号为：20180301、2018-0302、20180401）由华北制药集团新药研究开发有限责任公司提供。

1.2 主要试剂及仪器 吐温80标准品（批号：39H-0092）购自公司美国Sigma公司；二氯甲烷、硫氰钴铵及无水乙醇购自国药集团化学试剂有限公司；……