张闻伯，高新梅，王 喆，和传波，赵 强

0 引 言

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是临床常见的一种心血管疾病，其发生率逐年上升，人主动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移是动脉粥样硬化等心血管疾病的病理基础。目前AS发病机制尚未阐明，因此明确AS的确切发病机制并展开积极的防控措施具有重要的临床价值[1-2]。长链非编码RNA(LncRNA)在ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞中表达异常并可调控细胞增殖及凋亡[3]。LINC00205通过靶向miR-122-5p促进肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭[4]。但LINC00205对血管紧张素II(angiotensin II, AngII)诱导的血管平滑肌细胞表型转化的影响尚未可知。靶基因预测显示微小RNA-514a-3p(miR-514a-3p)与LINC00205存在结合位点，LncRNA LUCAT1通过调节miR-514a-3p/ULK1轴而促进非小细胞肺癌顺铂耐药[5]，LINC00205 可以通过抑制肝细胞癌的miR-184 来调节环氧化物水解酶表达，为肝细胞癌治疗提供方案[6]。已有研究表明miR-514a-3p通过调控细胞核因子κB(nuclear factor kappa gene binding，NF-κB)通路从而参与肿瘤发生过程，与 miR-514a-3p调控NF-κB抑制细胞凋亡有关[7]。但LINC00205是否调控miR-514a-3p/NF-κB通路而参与AS发生过程尚未清楚。因此，本研究采用AngII诱导的血管平滑肌细胞建立动脉粥样硬化模型，分析LINC00205/miR-514a-3p/NF-κB分子轴在血管平滑肌组织中发挥的作用及机制，为后续临床提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂人主动脉血管平滑肌细胞HA-VSMC(美国ATCC细胞库)，AngII(美国Millipore Corporation)，DMEM(美国Gibco)，Lipofectamine2000、Trizol试剂(购自USA，Thermo Fisher公司)，反转录和荧光定量PCR试剂(购自北京天根生化公司)，si-con、si-LINC00205、miR-con、miR-514a-3p mimics、anti-miR-con、anti-miR-514a-3p(购自广州锐博生物公司)，MTT试剂、凋亡检测试剂(北京索莱宝)，Transwell小室(美国Corning)，兔抗人CyclinD1、MMP2、MMP9、Cleaved-caspase-3抗体(美国Santa Cruz)，兔抗人p-p65、p-IкBα抗体(北京百奥莱博)，山羊抗兔IgG二抗(购自USA，Abcam)。

1.2细胞学实验

1.2.1 实验分组HA-VSMC细胞(1×105个/mL)接种于96孔板(100 μL/孔)，加入含10-5mmol/L AngII的培养液培养48 h[8]，为AngII组。……