苏 冬, 林先和

0 引 言

心肌缺血是由于冠状动脉血流量减少、氧气供应受限，使心肌细胞的营养成分达不到正常代谢所需的要求，导致心肌细胞的正常功能受到影响，是一种临床上常见的病理过程[1]。临床上缺血性心脏病可能表现为心绞痛、急性冠状动脉综合征、心肌梗死、心脏猝死和心力衰竭等多种情况。缺血性心脏病的死亡率约占总死亡原因的12%，在35～74岁的人群中，心肌梗死是导致死亡的主要原因[2]。SIRT3属于III类组蛋白去乙酰化酶，当能量需求增加时会使其激活，在多种组织中表达，在心脏中高度表达。SIRT3主要存在于线粒体及细胞核中，被认为是最重要的去乙酰化酶，通过去乙酰化各种线粒体蛋白，如叉头盒O转录因子(forkhead box O, FOXO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase 2,SOD2)等，调节线粒体动力学、代谢和细胞对氧化应激的反应等多种细胞生物学活性。而且SIRT3可以通过激活多种信号通路来调节自噬的进展，从而对细胞起到保护作用，其中包含AMPK-mTOR、Sirt3-FOXO、Sirt3-MnSOD等信号通路[3-4]。本研究以大鼠H9c2细胞为对象构建缺血缺氧模型，过表达SIRT3及添加SIRT3选择性抑制剂3-TYP，通过检测乙酰化FoxO1以及自噬相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达，并测定细胞凋亡率和LDH释放量，探讨SIRT3-FoxO1通路在心肌缺血缺氧以及自噬、凋亡过程中的可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料H9c2大鼠心肌细胞(普诺赛公司)，3-TYP(GLPBIO公司)，大鼠源SIRT3慢病毒过表达包装[汉恒生物科技(上海)有限公司]，GAPDH抗体(Affinity公司)，SIRT3抗体(Affinity公司)，Ac-FoxO1抗体(ThermoFisher公司)，LC3B抗体(Cell Signaling公司)，Bcl-2抗体(Bioss公司)，Beclin1抗体(Cell Signaling公司)，Bax抗体(Abcam公司)，RT Master Mix(TaKaRa公司)，TRIzol Reagent(ambion公司)，AnnexinⅤ-APC/7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒(Elabscience公司)。……