刁云辉 刘 琳 沙金平 薛 萌

1.河南省南阳市中心医院消化内科 (河南 南阳，473000) 2.河南省南阳市中心医院心内一科

肝癌是常见的恶性肿瘤，具有较高的发病率和死亡率，严重威胁人类生命健康[1]。长春新碱主要是从长春花叶中提取的二聚吲哚类化合物，具有良好的抗肿瘤作用。长春新碱通过作用于肿瘤细胞微管蛋白而干扰肿瘤细胞代谢，在临床中主要用于治疗急性淋巴细胞白血病、何金杰及非何金杰淋巴瘤[2]。磷脂酞肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路参与调控细胞的增殖、凋亡等生命过程，在肿瘤的发生发展过程中起重要作用[3，4]。研究显示，PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活可促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭[5]。目前，长春新碱能否通过调控PI3K/Akt信号通路发挥抗肝癌作用还未知。因此，本研究以肝癌Hep3B细胞为研究对象，旨在探究长春新碱对Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及是否通过调控PI3K/Akt信号通路发挥作用。

1 材料与方法

1.1 细胞和试剂 肝癌细胞系Hep3B购自中国科学院上海细胞库；胎牛血清(FBS)购自浙江天杭生物科技股份有限公司；RPMI 1640培养基、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和二喹啉甲酸(BCA)蛋白检测试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司；胰岛素样生长因子-1(IGF-1)购自美国Sigma公司；兔抗人Ki-67、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、磷酸化磷脂酞肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)和β-肌动蛋白(β-actin)抗体购自北京中杉金桥生物试剂公司，Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 Hep3B细胞用含10% FBS的RPMI 1640培养基培养，培养箱环境为温度37℃、CO2体积分数5%、湿度97%。……