黄萍 曾白林 童黄锦 徐梦丹 朱立忠

摘 要 目的：建立色差法测定药用植物蜡叶标本颜色的方法，研究温度和压力对蜡叶标本叶片颜色的影响，优化标本保色工艺。方法：色差法测定6种药用植物蜡叶标本叶颜色值，统计分析不同温度、不同压力总色差ΔE大小。结果：色差法测出的结果客观精确，6种药用植物标本色差冷藏加压优于常温加压（P<0.05）；压力大小对6种药用植物标本叶片色差影响不同，石榴叶加压100 kg、桔梗叶加压300 kg、凌霄叶、射干叶、菊叶、月季叶加压500 kg条件色差最小下保色最好。结论：色差法可应用于药用植物蜡叶标本颜色测定，冷藏加压法可应用于蜡叶标本保色研究。

关键词 药用植物 蜡叶标本 工艺优化

中图分类号：R281 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2021）15-0043-04

Determination of the color difference of wax leaf specimen of medicinal plants and the optimization of color preservation technology

HUANG Ping， ZENG Bailin， TONG Huangjin， XU Mengdan， ZHU Lizhong

（Department of Pharmacy， the Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine； Department of Pharmacy， Jiangsu Province Academy of Traditional Chinese Medicine， Nanjing 210028， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the determination of the color of medicinal plant wax leaf specimens by color difference method， to study the influence of temperature and pressure on the color of wax leaf specimens and to optimize the color preservation technology. Methods： The color values of six kinds of medicinal plant wax leaf samples were measured by color difference method， and the total color difference ΔE value at different temperatures and pressures was statistically analyzed. Results： The results measured by color difference method were objective and accurate， and the color difference of six kinds of medicinal plant specimens under cold storage and pressure was better than that under normal temperature （P<0.05）. The influence of pressure on the color difference of six kinds of medicinal plant specimens was different and the color was the best and the color difference was the smallest when the pomegranate leaves were pressurized under 100 kg， platycodon grandiflorum leaves under 300 kg， Chinese trumpet creeper leaves， belamcanda leaves， chrysanthemum leaves and rose leaves under 500 kg， respectively. Conclusion： The color difference method can be used for the determination of the color of medicinal plant wax leaf specimens， and the cold storage and pressure method can be used for the study of color retention of wax leaf specimens.

KEY WORDS medicinal plants； wax leaf specimen； process optimization

藥用植物标本在科研和教学中有重要的作用，是药用植物鉴别的永久性查考资料[1]。蜡叶标本因为有操作简便、成本低、环保、易于查阅、便携等优点被广泛应用，但由于长期暴露在空气中，药用植物色素对光、热、氧、微生物等变化敏感，稳定性差，颜色变枯黄，与鲜品色差大，失去了标本最直观的特征[2-3]，因此，标本保色研究是标本制作工艺中需要解决的难题。目前对标本颜色没法做到客观量化研究，实验者主要通过眼睛主观评判色差，评分误差大。课题组经过长期反复实践，优化传统的绑扎带捆扎标本制作方法，采用三角铁和螺丝加固标本，给标本夹施以重压，最高压力可达500 kg，将压制好的标本夹贮藏在冷藏室和常温室，通过实验考察六种药用植物蜡叶标本在不同温度、不同压力下的保色情况，并尝试用色差计测量蜡叶标本色度值，进一步优化标本保色工艺。

1 材料与方法

1.1 药用植物

石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季六种药用植物标本叶。

1.2 仪器

SBT710-1000 kg压力传感器（广州市斯巴拓电子科技有限公司）；SBT951-T控制显示仪表（广州市斯巴拓电子科技有限公司）；JZ-350色彩色差计（深圳市金准仪器设备有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 蜡叶标本色差测量方法

1）色差测定方法 测定前对仪器进行零位和白板较准，较准完毕后进入测试。选择光源条件D65/10°，色彩空间选择数据L*a*b值。在每片叶片正面中间叶肉部分中心位置重复扫描3次，取平均值。

1.3.2 色差测定的方法学考察

1）精密度考察 取石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季叶各1片，在相同测定条件下，连续测量6次，记录颜色值L、a、b。六种叶片L、a、b值的RSD<3%，仪器精密度良好。

2）稳定性考察 取石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季叶各1片，在相同测定的条件下，每隔10 min测1次，每次重复扫描3次，取平均值，记录颜色值L、a、b。六种叶片L、a、b值的RSD<3%，标本叶片在测量的1 h内稳定性良好。

3）重复性考察 取石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季叶各1片，在相同测定条件下，测量6个点，每次重复扫描3次，以平均值为测定结果记录颜色值L、a、b。六种叶片L、a、b值的RSD<3%，该方法重复性良好。

1.4 蜡叶标本的制作

采集的新鲜标本经清理、定型、整形后，分别放入8个标本夹中，采用传统绑扎带捆绑法，测得受力值10 kg（以下简称10 kg标本夹）。将标本夹改良，使用螺丝和三角铁加固，设定压力分别为100、300、500 kg，每个压力值的标本夹做2个。将10、100、300、500 kg标本夹分别放置常温（10～30 ℃）和冷藏库（2～10 ℃）保存，刚压制的标本每天换纸1次，3～4 d后隔天换纸，直至标本压制成功[5]。

1.5 蜡叶标本色差测定

压制标本设定的八种方案，即常温条件下压力分别为10、100、300、500 kg，冷藏条件下压力分别为10、100、300、500 kg，每种方案均压制标本石榴、凌霄、桔梗、射干、菊花、月季叶3株，标本压制24 h后每种植物标本取中段叶片10片，将测量的叶片做好标记并编号，按照“1.3.2”项下药材色差测定方法对样品叶进行颜色值的测定，计算标本叶片总色差ΔE。

1.6 统计方法

2 結果与分析

2.1 标本色差均值描述

通过方差分析结果可以看出，八种实验条件下六种药用植物标本色差均值间均有差异（表1）。从标本色差的均值描述，石榴叶加压100 kg、桔梗叶加压300 kg、凌霄叶、射干叶、菊叶、月季叶加压500 kg条件色差最小，六种药用植物标本色差最大均为常温加压500 kg。

2.2 温度对标本色差的影响

考察温度对标本色差影响，用t检验分析冷藏和常温两条件下色差均值差异，六种药用植物冷藏加压和常温加压条件下色差差异显著（P<0.05），标本色差冷藏加压比常温加压显著偏小（表2）。

2.3 压力对标本色差

考察压力对标本色差影响，用方差分析多重比较，分别将冷藏和常温加压10 kg这两种条件作为对照进行分析。在冷藏条件下，与冷藏加压10 kg比较，石榴叶加压100 kg、凌霄叶加压500 kg、月季叶加压500 kg标本色差明显偏小（P<0.05），桔梗叶、菊叶加压100、300、500 kg标本色差均明显偏小（P<0.05），射干叶在不同压力下标本色差并无显著差异（P>0.05）。在常温条件下，石榴叶、凌霄叶、桔梗叶加压500 kg时标本色差明显偏大（P<0.05），射干叶、菊叶、月季叶在不同压力下标本色差并无显著差异（P>0.05）。

3 讨论

传统评价蜡叶标本颜色的方法是目测法或者采用比色卡判定，受个人主观因素影响大，实验结果可信度有偏差。采用色差计法对标本颜色进行测定，操作简便直观准确，可将标本颜色进行量化研究，定量判断结果客观、精准可靠，规避传统目视法定性判断的主观性大的问题，所以此方法值得推广。色差计测定蜡叶标本颜色叶有它的缺点，色差计精密度高反应灵敏，测得数据误差大，在测量时需要多次测量取平均值来减少误差，并且只可用于色泽均匀叶片直接测量，课题组将尝试用色差法测定药用植物花的颜色，进一步研究标本花的保色。

药用植物蜡叶标本在制作过程中，影响药用植物标本保色的因素很多，有内在因素和外在因素。标本快速失水，有利于标本保色，一般标本含水量越低，成品率越高[6]，冷藏加压后标本叶片组织被压平破坏，导致其水分快速流出，缩短标本干燥时间[7]，课题组使用三角铁和螺丝固定标本夹，可将整理好的标本夹厚度缩小，使标本完全贴合于吸水纸，最大化的减少标本与吸水纸之间的空气含量，降低标本色素的氧化速度，使成品标本色泽保存得更好。在常温条件下加压到500 kg，标本内部不透气并不利于水分蒸散，反而影响标本保色。

色差法可应用于药用植物蜡叶标本颜色测定，冷藏加压保色优于常温加压，石榴叶加压100 kg、桔梗叶加压300 kg、凌霄叶、射干叶、菊叶、月季叶加压500 kg条件下保色最好。温度是影响药用植物标本保色的一个关键因素，压力大小对不同植物影响作用不同。不同药用植物品种，都可以采用冷藏加压的方法，通过实验选择最佳的条件组合来保证标本色泽最佳，实验考察颜色值的时间相对较短，可以在今后的实验中延长标本颜色考察时间，使实验更加完善。

参考文献

[1] 李润美， 肖凤霞， 邓素坚， 等. 3种药用植物标本保色保存效果[J]. 广州中医药大学学报， 2017， 34（4）： 576-580.

[2] 远婷， 李景柱， 刘远林. 冷热风交替法用于植物腊叶标本制作研究[J]. 山东工业技术， 2015（21）： 236.

[3] 刘秀娟. 药用植物浸制标本制作难点—花的保色[J]. 中国中医药现代远程教育， 2017， 15（14）： 146-149.

[4] 王光宁， 何瑞瑜， 陈天娇， 等. 广陈皮的外观颜色客观量化及其陈化年份判别模型的建立[J]. 中国实验方剂学杂志， 2018， 24（22）： 22-27.

[5] 周晶. 蜡果标本制作的选材及工艺[J]. 甘肃农业科技， 2015（10）： 81-84.

[6] 武睿， 侯文军. 药用植物腊叶标本的保色研究[J]. 安徽农业科学， 2015， 43（27）： 1-3； 24.

[7] 许源. 不同温度时间对草本植物标本烘干质量的影响[J].植物学研究， 2016， 5（4）： 125-131.