康星凯，卢文勇，蔡慧欣，杨文军

（温州医科大学附属第一医院 肝胆胰外科，浙江 温州 32500）

肝细胞癌（HCC）是全球最常见的癌症之一，复发和转移的发生率高，患者的生存率低[1-2]。HCC的高病死率与缺乏早期诊断的相应指标有关，往往在诊断出HCC时患者多已经到了中晚期，并已发生转移[3]。因此，寻找HCC早期诊断及治疗的标志物具有很大意义。人孕激素和脂联素受体（progestin and adipoQ receptor，PAQR）家族目前已发现的成员有11个，被命名为PAQR 1至11。近来研究已发现，PAQR4 在乳腺癌[4]、胃癌[5]、非小细胞肺癌[6-7]中上调，促使疾病进展、提示预后不良。然而目前有关PAQR4在HCC中的表达和作用机制仍不清楚。本研究拟通过TCGA数据库分析PAQR4在HCC组织中的表达，并通过实验研究敲低PAQR4后分析肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移情况，探讨PAQR4在HCC中产生作用的可能机制。

1 材料和方法

1.1 生物信息分析

本研究采用的基因表达数据和临床资料来源于TCGA数据库（http://cancergenome.nih.gov/）。临床病理资料包括患者的年龄、性别、家族癌症史等信息。

1.2 细胞培养

本实验使用了两种HCC细胞系Hep3B和Huh-7，购自美国模式培养物集存库（ATCC）。Hep3B细胞在添加丙酮酸钠、10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM中培养。Huh7 细胞在添加10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM中培养。细胞培养在37 ℃、5% CO2、饱和湿度条件的培养箱中，并视细胞的生长情况及时对细胞进行传代。

1.3 转染

使用两种siRNA下调Hep3B和Huh7 中PAQR4的表达，由吉玛基因公司合成。siPAQR4-1 序列：5’-AGGCUCCGUGCUCUAUCACTT-3’，5’-GUGAU AGAGCACGGAGCCUGC-3’；siPAQR4-2序列：5’-U CUUGCUCUGAGAGUUCAATT-3’，5’-UUGAACUC UCAGAGCAAGACG-3’。使用Lipofectamine2000（Life Technologies）将siPAQR4-1、siPAQR4-2和对照siRNA转染到Hep3B和huh7中，后续根据操作说明完成。将待处理细胞在6孔板中进行铺板，贴壁过夜后，待细胞达到……