戴媛 刘嘉莉 闵新栩 李蕴凡 毛芊 丁正年

老年人感染发生率高，容易进展为脓毒症、感染性休克，导致多器官损伤和功能障碍，威胁病人生命[1]。肺脏是脓毒症/感染性休克的重要受累器官之一[2]。研究显示，感染导致的严重肺损伤死亡率高达27%，是ICU内死亡的独立相关危险因素[3]。因此，深入揭示脓毒症/感染性休克所致肺损伤的发病机制，对发现并鉴定新的有效治疗措施有积极意义。

热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)是一类进化保守的分子伴侣，根据分子量大小可分为HSPA/HSP70、HSPB/HSP27、HSPC/HSP90、HSPH/HSP110以及DNAJ/HSP40等几个亚家族[4]。一些HSP如HSP70、HSP90被证实可显著减轻脓毒症/感染性休克肺损伤[5-6]，但尚未能成功临床转化，可能有更多其他HSP参与肺损伤的发生发展。

HSPA12A因其含有不连续ATP酶结构域，被认为是HSPA/HSP70家族的不典型成员。本团队的前期研究显示，HSPA12A在肥胖、非酒精性脂肪肝、肿瘤发生发展中具有重要作用[7-8]。但尚不清楚HSPA12A是否参与脓毒症、感染性休克肺损伤。本研究采用HSPA12A表达沉默的基因敲除鼠，探索HSPA12A在细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)所诱导的内毒素血症肺损伤中的作用。

1 材料和方法

1.1 实验动物 以C57BL/6为基因背景的Hspa12a基因敲除(Hspa12a-/-)鼠由本课题组前期构建完成[9]。本研究采用8～10周龄雄性小鼠用于实验，对照组采用一窝所生、同性别、野生型(WT)小鼠。实验动物饲养于南京大学模式动物研究所，并得到相应实验动物伦理学批准。

1.2 实验试剂 Escherichia coli LPS (0111:B4)、甲醛、抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体为Bioworld Technology公司产品(St. Louis，MN，美国)，抗HSPA12A抗体为Abcam公司产品(Cambridge，英国)，High-sig ECL western blotting 底物为天能公司产品(上海，中国)，BCA蛋白质测定试剂盒为Pierce产品 (Rockford，IL，美国)。……