柳双桂， 张慧燕， 王震华

［华中科技大学协和江南医院（武汉市江夏区第一人民医院）康复医学科，湖北武汉430200］

缺血性卒中是卒中的主要亚型（约87%），是成人死亡和长期残疾的主要原因之一［1］。脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells，BMECs）是脑血管系统的重要组成部分，在缺血性卒中的病理过程中起着重要作用［2］。内皮细胞的主要功能之一是在生理条件下维持血脑屏障的完整性［3］。缺血性卒中后，血脑屏障被破坏，导致出血性转化和脑组织梗死。因此，BMECs成为治疗缺血性卒中的新靶点。发育及DNA损伤反应调节蛋白1（protein regu⁃lated in development and DNA damage response 1，REDD1）受多种应激刺激诱导，包括氧糖剥夺（oxy⁃gen-glucose deprivation，OGD）和缺氧［4］，在氧化应激和炎症反应过程中具有多种生物学功能［5］。有证据表明REDD1的表达在OGD作用下上调［6］。最近，已有研究证明REDD1缺失减少了活性氧（reactive oxy⁃gen species，ROS）的产生和促炎细胞因子的表达［7］。此外，REDD1是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mamma⁃lian target of rapamycin，mTOR）的内源性抑制剂，可调节细胞应激反应［4］。然而，REDD1激活在脑梗死后血管生成中的作用尚未见深入研究。因此，本研究以OGD处理人BMECs（human BMECs，HBMECs）模拟缺血性脑卒中的细胞损伤，分析REDD1的血管保护作用和促血管生成机制，旨在寻找治疗缺血性脑卒中的潜在治疗靶点。

材料和方法

1 实验材料

HBMECs购自北京北纳创联生物技术研究院。2′，7′-二氢二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）、胎牛血清、DMEM培养基、脂质体3000、Trizol试剂和Alexa Fluor 594 Phalloidin（Invitrogen）；第1链cDNA合成试剂盒（Roche）；SYBRGreen PCRMaster Mix试剂盒（Applied Biosystems）；2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride，TTC）、裂解缓冲液+蛋白酶抑制剂混合物和小鼠抗BrdU抗体（Sig⁃ma-Aldrich）；BCA蛋白浓度测定试剂盒（Thermo Fisher Scientific）；PVDF膜和兔抗神经元核抗原（neuronal nuclei，NeuN）抗体（EMD Millipore）；兔抗REDD1和GAPDH抗体（Santa Cruz）；CCK-8试剂盒（Boster）；……