冯 敏， 吕 琦， 林 婷， 陈霞霞， 杨小玲， 林开平， 温俊平

（1福建省老年医院内分泌科，福建福州350009；2福建省立医院内分泌科，福建福州350001）

糖尿病肾病（diabetic nephropathies，DN）约占糖尿病患者的40%，是糖尿病最常见的慢性微血管并发症之一，是导致慢性肾脏病的主要原因［1］。研究发现，血清脂联素（adiponectin，ADPN）水平与糖尿病微血管并发症的发生有密切联系，ADPN可通过多种途径保护高糖环境下的肾系膜细胞［2-3］，对延缓DN的进程具有重要意义。微小RNA-221（microRNA-221，miR-221）是与肾脏生理功能密切相关的调节性miRNA，参与了ADPN抑制肾系膜细胞增殖的过程［4］。生物信息学研究发现金属蛋白酶组织抑制物3（tissue inhibitor of metalloproteinase 3，Timp3）是miR-221负调控的重要靶基因。Timp3在肾脏中高表达，是调控组织微环境和肾脏纤维化的重要因子，研究证实小鼠肾脏损伤和肾脏纤维化的发生与Timp3的表达缺失密切相关［5］。我们的前期研究发现，在体外高糖环境下，ADPN可通过下调miR-221靶向负调控Timp3表达来实现对小鼠肾系膜细胞的增殖抑制作用［6］。因此，本研究拟通过构建DN小鼠模型，探讨ADPN在体内调控miR-221/Timp3信号对小鼠肾脏生理功能和病理状态的影响，以期进一步揭示ADPN在DN中的保护机制。

材料和方法

1 动物

健康清洁级雄性C57BL/6小鼠36只，8周龄，体重约20~25 g，由福建医科大学实验动物中心提供，生产许可证号为SCXK（沪）2012-0002。

2 主要试剂

链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）购自Sigma；血糖试纸购自强生公司；pcDNA 3.1质粒、Lipo⁃fectamine 2000脂质体和Trizol试剂均购自Invitro⁃gen；血清ADPN检测试剂盒购自武汉云克隆科技公司；血清肌酐（serum creatinine，SCr）测定试剂盒购自Thermo Fisher；尿蛋白测定试剂盒购自R&D；Mir-X™miRNA First-Strand Synthesis Kit、Prime Script RT Master Mix和SYBR Advantage qPCR Premix均购自TaKaRa；miR-221抑制剂和miR-221抑制剂对照试剂均购自广州锐博生物科技公司；……