蔡贤惠

（厦门市仙岳医院医学检验科，福建 厦门 361012）

甲肝的全称是甲型病毒性肝炎，属于一类急性传染疾病，由甲型肝炎病毒引发，传播是通过粪-口道开展，甲肝IgM（HAV-IgM）抗体的测定可对甲肝进行诊断[1]。我院研究用酶联免疫吸附试验（ELISA）检验HAV-IgM抗体，由具体需求和日常标本中迅速获取科学的数据，目前我院已行电化学发光免疫分析法（ECLIA），用于对HAV-IgM抗体的测定。依据我院管理的标准化准则与实验室质量标准，检验项目时，评估检验系统的基本性能，分析其是否与要求符合。所以，临床应用此方式时，能够用这两类方式对HAV-IgM抗体检测做好评估和对比。

1 资料与方法

1.1 一般资料 时间：2018年6月至2020年12月；参与患者：90例我院住院门诊患者，其中，肝功能谷丙转氨酶异常就诊的普通内科门诊患者34例，有消化道症状的患者39例，健康体检者17名。90例患者中，男女均为45例，年龄6～85岁，平均（43.68±16.05）岁；两组患者信息资料均衡（P＞0.05），可对比。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 ECLIA 全自动电化学发光免疫分析仪（Roche公司，E601），配套HAV-IgM抗体试剂，定标液、质控品。

1.2.2 ELISA HAV-IgM抗体酶免试剂（北京），检验仪器：全自动酶免分析仪（爱康）。

1.3 方法 取所有患者未进食时的静脉血3 mL，分离血清，用ECLIA、ELISA对患者的血清标本HAV-IgM抗体进行测定。评估两类方式HAV-IgM抗体检测样本一致。需仔细对患者完整的病历进行查询，依据疾病的流行特征与检查数据，联合患者的具体状况对患者综合干预，做好判断，依据肝炎病毒学测定数据，诊断病原学，最终诊断患者是否是甲肝。

IgG胶乳颗粒实际吸附RF：取纯化的IgG胶乳颗粒试剂吸附RF，将上述方式分别取血清和吸附与纯化的人IgG胶乳颗粒试剂作为系列梯度混合，如血清和试剂混合比例1∶2、1∶3、1 ∶4，均于37 ℃水浴反应0.50 h，10 000 r/min，离心半径 8 cm，离心后10 min取上清液。

1.3 观察指标 ①观察HAV-IgM抗体数据。②观察不同方法对HAV-IgM抗体结果和临床诊断。③观察RF吸附前后ELISA测定的OD值。

2 结果

2.1 HAV-IgM抗体数据 用ECLIA、ELISA方法同时对血清标本HAV-IgM抗体进行检验，不同方法阳性符合率：（4/30）×100.00%=13.33%，阴性符合率：（60/60）×100.00%=100.00%，总符合率：[（4+60）/90]×100.00%=71.11%。见表1。

表1 HAV-IgM抗体数据（n）

2.2 不同方法对HAV-IgM抗体结果和临床诊断 两种方式检测数据不符的标本有26例，26例患者最后诊断的HAV感染有 2例，除了HAV，其他病毒性肝炎（n=5）、无病毒性肝炎病史（n=19）。按照诊断划分小组为甲肝、非甲肝组。按疾病诊断为依据，计算两种方法测定HAV-IgM抗体对疾病诊断的敏感度、特异性、阳性检出率，其中，ECLIA敏感度=66.67%，特异度=100.00%，阳性检出率=4.43%。ELISA敏感度=100.00%，特异度=71.43%，阳性检出率=33.33%。见表2。

表2 不同方法诊断HAV-IgM抗体结果（n）

2.3 RF吸附前后ELISA测定的OD值 OD为0.182的血清吸附RF前后ECLIA测定均为阴性，OD数值是0.255的血清吸附 RF前后ECLIA测定均呈阳性。所以，ELISA测定高RF水平血清，假阳性率要比ECLIA法高。对IgG胶乳颗粒实际吸附RF前后ELISA法测定OD值，吸附后OD数值明显要比吸附前低（P＜0.05）。见表3。

表3 RF吸附前后ELISA测定的OD值

3 讨论

甲型病毒肝炎是因HAV诱发的急性传染疾病，世界范围内均匀分布，人体在感染HAV后多呈亚临床症状，需结合实验室测定辅助诊断近期感染甲型肝炎病毒十分必要。实验室经对HAV-IgM抗体的测定，患者一旦感染病毒，7 d内HAV-IgM抗体阳性占比较高，近1/3的患者在发病14 d内呈阳性，10%的患者在1个月内呈阳性，4周后几乎全部病例均有阳性表现[2-4]。HAV-IgM抗体可在人体血液中维持半年，后期会消失，HAVIgM阳性则代表患者曾有感染HAV，可对抗体发挥保护作用。因此，HAV-IgM抗体是早期甲型肝炎诊断的特异性血清标志物，在对HAV-IgM抗体测定呈阳性时，表示患者有感染甲型肝炎病毒的可能。

现主要用ECLIA、ELISA两类方法检测HAV-IgM抗体展开比较，结果发现，两种方法的总符合率为71.11%，一致性差异非常显著，特别是阳性符合率过低。两种方法对结果测定不符的患者进一步追踪随访，发现最终诊断成HAV的患者仅有 2例，这表示ELISA对HAV-IgM抗体测定虽然较之电化学发光敏感度高，但容易引起假阳性，这主要是检验方式不同引起，可能和标本自身关联较深，主要是测定ELISA时，测定血清标本含类风湿因子（RF），可充当桥联物联合不同的特异性抗体IgMFc段，容易引起假阳性问题[5-6]。所以，慢性乙型肝炎、自身免疫性肝病在测定HAV-IgM呈阳性时，经对HAV重叠感染的观察，消除RF与另外因素造成的假阳性[7]。

Roche检测法ECLIA对HAV-IgM的测定中所获取的测定理念，以抗Fdλ试剂充当样本加强干预，对复合物做好标记，在与疾病病原抗衡的作用下将异性IgG阻断，添加生物素化特异性人IgM单克隆抗体等，最后经光电倍增管对HAV-IgM抗体进行检验[8]。ECLIA对HAV-IgM的测定中，类风湿因子不会造成感染，与ELISA相较，其临床对疾病的诊断低下，接近于临床流行病学，因为甲型肝炎是自限性疾病，长时间会以亚症状展现，尤其是儿童感染多以隐匿性呈现，临床症状不明显[9]。卫生部门于计划免疫管理中就加入乙肝疫苗，可充分降低婴幼儿乙肝病毒感染的发生。目前，在越来越多的人接种甲肝疫苗的局势下，我国甲肝疾病发生率逐渐降低，发病率在逐渐下降。接种甲型肝炎疫苗3周后，20%的接种者能产生HAV-IgM抗体，应做好判断[10]。

研究用两类不同方法为全部患者随访、追踪，发现ECLIA的HAV-IgM抗体数据临床具有较高符合率，特异性高，假阳性较低，可避免患者因HAV-IgM抗体阳性影响检验结果，给患者造成较大的经济损失，避免患者承受过大的心理负担。ECLIA法检验时间较短，标本测定效率高，能够加入到临床中作为疾病的诊断参考。